【摘要】： 脂肪細(xì)胞補(bǔ)體相關(guān)蛋白gAcrp30是已分化的脂肪細(xì)胞特異分泌的蛋白質(zhì)因子，主要作用是促進(jìn)脂肪細(xì)胞新成代謝，分子量25kDa，有文獻(xiàn)報導(dǎo)，無論是從血漿中提取的，還是利用基因工程手段從大腸桿菌中表達(dá)制備的人不含信號肽的Acrp30——gAcrp30，均能顯著地誘導(dǎo)小鼠肌體內(nèi)游離脂肪酸在肌肉中氧化，并相應(yīng)降低體重—從而表明gAcrp30是人們夢寐以求的一類激素之一，其作用機(jī)理是因為它能將信號從脂肪組織傳導(dǎo)至肌肉。促使肌肉組織大量燃燒脂肪產(chǎn)生能量從而減少脂肪的儲存。而傳統(tǒng)的減肥的方法有兩種：一、使腸壁的吸收減少，通過節(jié)食來完成，這樣就會影響到腸壁正常物質(zhì)的吸收；二、過加大運(yùn)動量的方法，并在運(yùn)動后少量進(jìn)食，這對于一些患糖尿病和心臟病的病人無疑是不可行的，況且肥胖病人有大多數(shù)罹患這些疾病。如何解決這些問題，gAcrp30可為一種好的方法。 本研究通過RT-PCR技術(shù)從小鼠脂肪細(xì)胞中克隆了不含信號肽序列的全長小鼠gAcrp30 cDNA，序列測定表明本研究已克隆的gAcrp30序列同國外報道的序列一致。將不含信號肽序列的小鼠Acrp30基因克隆至原核表達(dá)載體pET-21a中，構(gòu)建成重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET-21a/gAcrp30。將該重組質(zhì)粒導(dǎo)入宿主菌BL21，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后獲得高水平表達(dá)(目標(biāo)蛋白表達(dá)＞20％)。經(jīng)SDS-PACE分析表明：表達(dá)產(chǎn)物主要為不可溶性的蛋白質(zhì)聚集體-包涵體。將已收集的菌體經(jīng)超聲破碎后，2mol/L尿素，1％吐溫-80洗滌后，離心收集包涵體。該包涵體經(jīng)8mol/L尿素溶解變性后，采用透析和稀釋二種復(fù)性方法進(jìn)行復(fù)性比較，復(fù)性樣品經(jīng)陰離子交換層析Q—Sepherose Fast Flow和Q-Sepherose high performance(h.p.)二步陰離子交換層析得到單一條帶，分子量為25KDa。免疫印跡結(jié)果表明，通過表達(dá)和純化所獲得的蛋白為小鼠gAcrp30。上述研究結(jié)果將為進(jìn)一步研究小鼠gAcrp30的理化性質(zhì)及人gAcrp30的研究奠定基礎(chǔ)。 第一軍醫(yī)大學(xué)碩1..論文(王樂媛)小鼠gAc甲30的基因克隆、表達(dá)及生物活性研究 肥胖癥問題不僅在發(fā)達(dá)國家十分普遍，在發(fā)展中國家也是不可忽視 的問題。亞洲人脂肪主要堆積在腹部。有肥胖癥的人最容易患糖尿病、 心臟病、高血壓及中風(fēng)疾病，防止和減少體重超重方法就是不要過量 飲食，加強(qiáng)體育運(yùn)動。中國在國民經(jīng)濟(jì)穩(wěn)步增長的10年間從1990年 到2000年，大中城市中身體超重和患肥胖癥人數(shù)從9.7%增加到14.9 %，鄉(xiāng)村從6.8%增加到8.4%，gAcrp30的開發(fā)成功，對我國的肥 胖癥患者將是一個福音，從而間接的減少由肥胖而引發(fā)的搪尿病和高 血壓病，對提高整體的國民健康水平將具有十分重要的意義。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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1 許婉寧,丁宗一;肥胖基因表達(dá)研究的方法學(xué)及進(jìn)展[J];中華兒科雜志;1999年11期

本文編號：2751513