本文關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌HpaA-VacA融合蛋白卵黃抗體的制備及生物活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過基因工程方法構(gòu)建幽門螺桿菌黏附素(HpaA)、細(xì)胞空泡毒素(Vac A)及Hpa A-Vac A融合蛋白作為免疫原,免疫蛋雞制備特異性卵黃抗體(Ig Y),并研究其生物活性,為Hp感染的治療與預(yù)防開辟了一條新路徑,同時(shí)也為制備抗Hp感染的制劑奠定基礎(chǔ)。方法與結(jié)果1.采用PCR方法分別克隆幽門螺桿菌Hpa A、Vac A及Hpa A-Vac A融合基因。克隆載體酶切和測(cè)序結(jié)果均顯示,Hp Hpa A、Vac A和Hpa A-Vac A融合基因成功克隆到p GEM-3Z質(zhì)粒中。2.通過DNA重組技術(shù)分別構(gòu)建Hp Hpa A、Vac A和Hpa A-Vac A融合基因的原核表達(dá)系統(tǒng)。SDS-PAGE結(jié)果表明,以上原核表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建成功,且Hpa A、Vac A和Hpa A-Vac A融合蛋白均高效表達(dá)。3.通過親和層析法純化Hpa A、Vac A及Hpa A-Vac A融合蛋白,SDS-PAGE分析其純度,Western blot鑒定其免疫學(xué)活性。結(jié)果顯示,純化后的三種重組蛋白純度均達(dá)到90%以上,且均能夠被Hp感染病人的血清所識(shí)別,即三種融合蛋白都具有良好的免疫學(xué)活性。4.以純化的Hpa A、Vac A及Hpa A-Vac A融合蛋白分別免疫蛋雞,分離提純Ig Y,鑒定其生物學(xué)活性。SDS-PAGE測(cè)定Ig Y純度均為85%左右;Western blot顯示Ig Y都具有良好的免疫特異性即能與相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性結(jié)合;間接ELISA結(jié)果顯示,Hpa A-Ig Y效價(jià)為1:12800;Vac A-Ig Y效價(jià)為1:12800;Hpa A-Vac A-Ig Y效價(jià)為1:6400;而Hpa A-Vac A-Ig Y分別與Hpa A和Vac A抗原反應(yīng),效價(jià)可達(dá)1:6400和1:3200。結(jié)論本文主要通過基因工程及動(dòng)物免疫的方法成功制備出高效價(jià)的抗幽門螺桿菌的特異性Hpa A-Ig Y、Vac A-Ig Y、Hpa A-Vac A-Ig Y,并研究比較了其生物學(xué)活性,證實(shí)其均具有良好的免疫學(xué)活性,從而為制備集預(yù)防與治療為一體的抗幽門螺桿菌感染的制劑奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：幽門螺桿菌 黏附素HpaA 細(xì)胞空泡毒素VacA HpaA-VacA融合基因 IgY
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-11
• 實(shí)驗(yàn)流程11-12
• 第一章 幽門螺桿菌HpaA、VacA和融合基因HpaA-VacA克隆12-32
• 一、材料與方法12-24
• 1 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 2 實(shí)驗(yàn)方法15-24
• 二、結(jié)果24-30
• 1 Hp HpaA基因的克隆與測(cè)序24-25
• 2 Hp VacA基因的克隆與測(cè)序25
• 3 Hp HpaA-VacA融合基因的克隆與測(cè)序25-30
• 三、討論30-32
• 第二章 HpaA、VacA和融合基因HpaA-VacA原核表達(dá)載體構(gòu)建及蛋白表達(dá)活性研究32-50
• 一、材料與方法32-40
• 1 實(shí)驗(yàn)材料32-35
• 2 實(shí)驗(yàn)方法35-40
• 二、結(jié)果40-48
• 1 HpaA、VacA和HpaA-VacA融合基因的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果40
• 2 pQE30-HpaA-VacA工程菌表達(dá)條件優(yōu)化結(jié)果40
• 3 融合蛋白的純化及其純度測(cè)定40-41
• 4 純化目的蛋白Western blot結(jié)果41-48
• 三、討論48-50
• 第三章 卵黃抗體IgY的制備及其生物學(xué)活性測(cè)定50-58
• 一、材料與方法50-52
• 1 實(shí)驗(yàn)材料50-51
• 2 實(shí)驗(yàn)方法51-52
• 二、結(jié)果52-56
• 1 IgY純度52
• 2 IgY的Western blot結(jié)果52
• 3 IgY效價(jià)52-56
• 三、討論56-58
• 全文總結(jié)58-60
• 1 創(chuàng)新點(diǎn)58
• 2 研究展望58-60
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 附錄65-73
• 附錄一 縮略詞中英文對(duì)照65-66
• 附錄二 碩士期間發(fā)表的論文66
• 附錄三 序列圖66-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 文冰;危由春;蔣澤先;張進(jìn);聶榮慶;;特異性抗幽門螺桿菌IgY的制備和活性測(cè)定[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年06期

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3 謝獻(xiàn)勝;王峰;周新民;劉俊棟;盧煒;周冬仁;;抗幽門螺旋桿菌卵黃抗體的制備及其體外抑菌試驗(yàn)[J];中國(guó)家禽;2005年13期

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  本文關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌HpaA-VacA融合蛋白卵黃抗體的制備及生物活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：275030