【摘要】： 關(guān)于脊椎動(dòng)物免疫系統(tǒng)現(xiàn)在生物學(xué)界的共識(shí)是，免疫系統(tǒng)有兩個(gè)經(jīng)典的層面，即先天性免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)。兩種系統(tǒng)的共同特征便是利用高度特化的免疫細(xì)胞(主要是白細(xì)胞)來(lái)保護(hù)肌體。最進(jìn)越來(lái)越多的證據(jù)表明免疫還存在另外一個(gè)層面—細(xì)胞自主免疫，簡(jiǎn)單來(lái)說就是普通的組織細(xì)胞也可以通過細(xì)胞因子引發(fā)建立復(fù)雜的抗病機(jī)制從而保護(hù)自身。P47GTP酶便是其中之一。P47GTP酶在小鼠中有22個(gè)家族成員，可以被IFNγ大量誘導(dǎo)表達(dá)，被認(rèn)為是細(xì)胞自主的抗病因子，具體的功能機(jī)制至今還是不很清除。 本論文的工作主要是對(duì)其中一個(gè)成員IIGP-1的研究。首先我們發(fā)現(xiàn)IIGP-1在健康小鼠皮膚的某些毛囊中有表達(dá)。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)顯示IIGP-1在大多數(shù)的健康小鼠組織中都有本底表達(dá)，特別是在肝臟中的表達(dá)十分的強(qiáng)烈。通過對(duì)IFN受體敲除小鼠的檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)這種本底表達(dá)在某些組織(例如肝臟和心臟)基本上不是依賴IFN的，而在某些組織主要是依賴IFN的。最后對(duì)野生型小鼠和IFNγ受體敲除小鼠的比較表明，Listeria monocytogenes感染24小時(shí)后的肝臟有IIGP-1的表達(dá)由本底表達(dá)有大幅的提高，這種誘導(dǎo)完全是依賴IFNγ的。 本研究第一次揭示了P47GTP酶在健康小鼠組織中有本底水平的表達(dá)，并且第一次證明了P47GTP酶表達(dá)有IFN非依賴的途徑。這結(jié)果徹底改變了IFN是P47GTP酶唯一的誘導(dǎo)途徑的觀點(diǎn)，從而為進(jìn)一步的對(duì)P47GTP酶功能和機(jī)理的研究提供了一個(gè)全新的背景。
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

更缺乏準(zhǔn)確性了。所以這里得出的結(jié)論只能是小鼠表皮似乎(尤其是2天的)有工IGP一1的表達(dá)。免疫熒光標(biāo)記(圖3.2)的目的是觀察工IGP一1表達(dá)在表皮中的確切位置，從上面的結(jié)果來(lái)看，的確表皮層和真皮層交界基膜(basallayer)上(keratiflocyte)的細(xì)胞質(zhì)被染成了綠色，這和Dr.Haase的觀察相符。但似乎角質(zhì)形成細(xì)胞上方的表皮層其他部分也被或多或少的染成了綠色，這很可能是抗血清和其他物質(zhì)非特異性的雜交造成的。所以，我們又試圖作進(jìn)一步的改進(jìn)，試驗(yàn)不同的實(shí)驗(yàn)條件不同的二抗，l8

上邊曾經(jīng)提及HGP一和HGP一2高度的同源(氨基酸同源性達(dá)75%)，165雖然是一種特異性很強(qiáng)的抗體，但還是區(qū)分不開HGP一和HGP一2。而我們研究的重點(diǎn)是工IGP一1，這樣一種能特異的識(shí)別IIGP一但不是I工GP一2的抗體是十分必需的。綜合上面兩點(diǎn)，下一步我們先純化了IIGP一1的抗血清165/3，之后又檢測(cè)了3種HGP一1的單克隆抗體的特異性。(二)IIGP一1抗血清(165/3)的親和層析純化:抗血清純化的基本原理是將抗原固化在CNBr活化了的Sephar0Se凝膠柱上，之后將抗血清過柱，特異性的抗體便被和柱上的抗原結(jié)合，最后用酸或堿洗脫便可得到純化了的抗體。在這里我們用了細(xì)菌表達(dá)的IIGP一1重組蛋白(fromUthaiah)作抗原，純化了165/4和165/3抗血清(第4次和第3次抗原免疫后的兔抗血清)并同時(shí)純化了165/0(抗原免疫前的血清)作為對(duì)照。

上是純化的抗血清的SDS一PAGE考馬斯亮藍(lán)染商業(yè)購(gòu)買的抗IGTP單克隆抗體作為對(duì)照，165，同理165/4F卜3是第1和第3收集部分的混收集部分的混合。注:168/120在lgG重鏈上端牛血清清蛋白。洗脫結(jié)果從圖4.1可以看到，165/3也有少量的蛋白，165/0如所料沒65/4F2，165/4的FZ和F3合在一作了SDS一PAGE和CoomaSSie染色。是工gG)話，在還原條件下將會(huì)有兩條多膚鏈，大小分別是在55KDa

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