【摘要】： 關(guān)于脊椎動物免疫系統(tǒng)現(xiàn)在生物學界的共識是，免疫系統(tǒng)有兩個經(jīng)典的層面，即先天性免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)。兩種系統(tǒng)的共同特征便是利用高度特化的免疫細胞(主要是白細胞)來保護肌體。最進越來越多的證據(jù)表明免疫還存在另外一個層面—細胞自主免疫，簡單來說就是普通的組織細胞也可以通過細胞因子引發(fā)建立復雜的抗病機制從而保護自身。P47GTP酶便是其中之一。P47GTP酶在小鼠中有22個家族成員，可以被IFNγ大量誘導表達，被認為是細胞自主的抗病因子，具體的功能機制至今還是不很清除。 本論文的工作主要是對其中一個成員IIGP-1的研究。首先我們發(fā)現(xiàn)IIGP-1在健康小鼠皮膚的某些毛囊中有表達。進一步的實驗顯示IIGP-1在大多數(shù)的健康小鼠組織中都有本底表達，特別是在肝臟中的表達十分的強烈。通過對IFN受體敲除小鼠的檢測，我們發(fā)現(xiàn)這種本底表達在某些組織(例如肝臟和心臟)基本上不是依賴IFN的，而在某些組織主要是依賴IFN的。最后對野生型小鼠和IFNγ受體敲除小鼠的比較表明，Listeria monocytogenes感染24小時后的肝臟有IIGP-1的表達由本底表達有大幅的提高，這種誘導完全是依賴IFNγ的。 本研究第一次揭示了P47GTP酶在健康小鼠組織中有本底水平的表達，并且第一次證明了P47GTP酶表達有IFN非依賴的途徑。這結(jié)果徹底改變了IFN是P47GTP酶唯一的誘導途徑的觀點，從而為進一步的對P47GTP酶功能和機理的研究提供了一個全新的背景。
【學位授予單位】：東北師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R392
【圖文】：

更缺乏準確性了。所以這里得出的結(jié)論只能是小鼠表皮似乎(尤其是2天的)有工IGP一1的表達。免疫熒光標記(圖3.2)的目的是觀察工IGP一1表達在表皮中的確切位置，從上面的結(jié)果來看，的確表皮層和真皮層交界基膜(basallayer)上(keratiflocyte)的細胞質(zhì)被染成了綠色，這和Dr.Haase的觀察相符。但似乎角質(zhì)形成細胞上方的表皮層其他部分也被或多或少的染成了綠色，這很可能是抗血清和其他物質(zhì)非特異性的雜交造成的。所以，我們又試圖作進一步的改進，試驗不同的實驗條件不同的二抗，l8

上邊曾經(jīng)提及HGP一和HGP一2高度的同源(氨基酸同源性達75%)，165雖然是一種特異性很強的抗體，但還是區(qū)分不開HGP一和HGP一2。而我們研究的重點是工IGP一1，這樣一種能特異的識別IIGP一但不是I工GP一2的抗體是十分必需的。綜合上面兩點，下一步我們先純化了IIGP一1的抗血清165/3，之后又檢測了3種HGP一1的單克隆抗體的特異性。(二)IIGP一1抗血清(165/3)的親和層析純化:抗血清純化的基本原理是將抗原固化在CNBr活化了的Sephar0Se凝膠柱上，之后將抗血清過柱，特異性的抗體便被和柱上的抗原結(jié)合，最后用酸或堿洗脫便可得到純化了的抗體。在這里我們用了細菌表達的IIGP一1重組蛋白(fromUthaiah)作抗原，純化了165/4和165/3抗血清(第4次和第3次抗原免疫后的兔抗血清)并同時純化了165/0(抗原免疫前的血清)作為對照。

上是純化的抗血清的SDS一PAGE考馬斯亮藍染商業(yè)購買的抗IGTP單克隆抗體作為對照，165，同理165/4F卜3是第1和第3收集部分的混收集部分的混合。注:168/120在lgG重鏈上端牛血清清蛋白。洗脫結(jié)果從圖4.1可以看到，165/3也有少量的蛋白，165/0如所料沒65/4F2，165/4的FZ和F3合在一作了SDS一PAGE和CoomaSSie染色。是工gG)話，在還原條件下將會有兩條多膚鏈，大小分別是在55KDa

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本文編號：2745893