發(fā)布時間：2020-07-06 09:21

【摘要】：谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最主要的一種興奮性神經(jīng)遞質，在神經(jīng)元的諸多活動中如快的突觸傳遞和神經(jīng)可塑性等方面發(fā)揮重要作用。谷氨酸在神經(jīng)元內合成并被輸送至神經(jīng)終末，貯存于突觸囊泡內，當神經(jīng)元去極化時，囊泡內的谷氨酸以Ca~(2+)依賴方式釋放于突觸間隙中，并與突觸后不同的谷氨酸受體結合而發(fā)揮不同的生理功能。與其它遞質如單胺類和乙酰膽堿等類似，谷氨酸必須被轉運至突觸囊泡內才能進行胞吐釋放，這種轉運作用是通過特異性的囊泡膜谷氨酸轉運體(VGluT)來完成的。近十年來，人們運用分子生物學技術成功地分離、純化并鑒定出三種特異性VGluTs并被分別命名為VGIuT1、VGluT2和VGluT3。它們都屬于SLC171型磷酸轉運體家族，有12個跨膜結構域，其N端和C端都朝向胞漿。新近研究表明VGluTs尤其是VGluT1和VGluT2選擇性地位于谷氨酸能軸突終末內，此發(fā)現(xiàn)較好地解決了形態(tài)學研究中標記谷氨酸能軸突終末的難題，故目前人們己將VGluT1和VGluT2做為谷氨酸能軸突終末的標識物。由于VGluT1和VGluT2系新近克隆出的特異性轉運體，故對其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內的分布研究主要集中在大鼠，而其它種屬的研究尚未見報道。另外，VGluT1和VGluT2在大鼠神經(jīng)系統(tǒng)同一區(qū)域的分布也存在明顯差異，此種差異是否也出現(xiàn)于其他種屬中，到目前為止同樣未見報道。 延髓背角淺層，特別是Ⅱ層是面口部傷害性信息傳遞的初級 第四軍醫(yī)大學碩士學位論文 門戶，大量的神經(jīng)膚能纖維和終末如神經(jīng)降壓素(NT)和腦啡膚 (ENK)廣泛分布于該區(qū)域。雖然生理學研究表明，位于n層內 的NT或ENK能終末可能發(fā)揮興奮作用，在痛信息的傳遞和調控 中具有重要意義。但到目前為止尚缺乏較直接的形態(tài)學證據(jù)。本 研究首先運用免疫組織化學染色方法，在光鏡下對VGluTI和 VGlu代在大鼠、貓和猴脊髓內，特別是背角淺層內的表達及其分 布進行了觀察。在此基礎上進一步應用免疫熒光組織化學雙重染 色和包埋前免疫電鏡雙重標記技術在激光共聚焦顯微鏡和電鏡下 觀察了大鼠延髓背角淺層內NT/ENK與VGluTZ之間是否存在共 存關系。 第一部分 型和H型囊泡膜谷氨酸轉運體在大鼠、貓 和猴脊髓內的定位分布 本研究運用免疫組織化學方法對vGluTI樣和VGluTZ樣陽性 物質在大鼠、貓和猴脊髓內的定位分布進行了觀察和比較。結果 如下:(1)VGluTI樣和VGluTZ樣陽性物質主要分布于大鼠、貓 和猴脊髓灰質的神經(jīng)纖維和終末內，胞體內未見陽性物質。其中 VGluTI樣陽性纖維和終末在大鼠和貓脊髓背角n層內側部(In) 及Hl一Vl層的內側部分布最為密集，在I層和n層外側部(I 10) 的分布較稀疏，其它層能觀察到中等密度的分布。而在猴脊髓， VGtuTI樣陽性纖維和終末的分布與大鼠和貓有所不同，分布最密 集的部位為I層、IIi層及nl--VI層內側部，而在Ifo層及nl--VI 層外側部較稀疏，甚至觀察不到陽性結構。在猴的脊髓前角，僅在 IX層觀察到較稀疏的陽性產(chǎn)物。除此之外，在猴的脊髓后索內側 部還能見到散在的陽性纖維，而在大鼠和貓未觀察到;(2)VGluTZ 樣陽性纖維和終末在三種動物脊髓灰質內均呈中等強度的分布， 其中在I層、H層和X層內分布較密集，在111一Vl層內側部的分 第四軍醫(yī)大學碩士學位論文 布則較稀疏。在猴的背角深層外側部，陽性纖維和終末較稀疏; (3)在大鼠的外側脊核(L SN)內能見到中等強度的VGluTZ樣陽性 纖維和終末，而在貓和猴中未觀察到。 以上結果表明:VGluTI樣和VGtuTZ樣陽性纖維和終末在大 鼠、貓和猴脊髓中均有分布，但其分布有一定的種屬差異。提示 興奮性谷氨酸能軸突終末可能在不同動物脊髓的興奮性神經(jīng)元的 活動中發(fā)揮其不同的作用。 第二部分 大鼠延髓背角淺層內H型囊泡膜谷氨酸轉運體樣與神經(jīng)降壓 素/亮氨酸腦啡膚樣陽性終末的共存研究 本研究運用雙重免疫熒光組織化學和包埋前免疫電鏡雙重標 記技術，觀察了正常大鼠延髓背角淺層內VGluTZ樣陽性終末與 NT或Leu.ENK的共存關系。結果顯示:(l)在激光共聚焦顯微 鏡下觀察到NT樣、ENK樣陽性纖維和終末主要集中分布于H層， I層內陽性結構較少，很少觀察到陽性細胞。而VGluTZ樣物質呈 點狀廣泛分布于延髓背角淺層內，其中VGluTZ樣陽性纖維和終末 的分布以I層、H層最密集，其余部位呈中等強度分布;(2)大部 分NT樣和部分ENK樣陽性物質與VGluTZ樣陽性物質共存于同 一個神經(jīng)終末內;(3)電鏡下觀察到VGluTZ樣陽性物質均分布于 突觸前終末內，與突觸后結構形成非對稱性突觸，樹突和胞體中 未見VGfuTZ陽性物質。而NT樣或ENK樣陽性物質既見于突觸 前終末內，又見于突觸后神經(jīng)元的胞體和樹突內;(4)電鏡下還 觀察到VGluTZ樣陽性軸突終末同時呈NT樣或ENK樣免疫陽性， 雙標的軸突終末與陰性樹突形成非對稱性突觸。同時也觀察到 VGluTZ樣陽性軸突終末或陰性軸突終末分別與NT樣或ENK樣陽 性樹突形成非對稱性或對稱性突觸。以上結果提示:延髓背角淺 層內部分NT能及ENK能神經(jīng)終末可作為突觸前成分來調節(jié)同一 第四軍醫(yī)大學碩士學位論文 終末內谷氨酸的釋放，從而進一步影響口面部傷害性信息的傳遞 和調控，同時部分NT樣和ENK樣陽性神經(jīng)元作為突觸后成分也
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R329

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本文編號：2743454