【摘要】： FLT3配體(FL)是1993年由Lyman等以可溶性FLT3受體為底物先后從鼠和人的細(xì)胞系克隆獲得其基因。由235個(gè)氨基酸組成。開始的26個(gè)氨基酸組成信號肽，細(xì)胞外區(qū)156個(gè)氨基酸，跨膜區(qū)23個(gè)氨基酸以及胞漿區(qū)20個(gè)氨基酸。廣泛分布于人體的各種組織，在外周血單個(gè)核細(xì)胞中表達(dá)水平最高，F(xiàn)L是一種具有促進(jìn)早期造血功能的細(xì)胞因子。在再生障礙性貧血、骨髓抑制等一系列造血功能障礙時(shí)，血清FL濃度升高，F(xiàn)L是評價(jià)造血功能的可靠指標(biāo)之一。FL單用或與其它細(xì)胞因子聯(lián)合應(yīng)用，可以有效地?cái)U(kuò)增造血干/祖細(xì)胞，增加定向造血干/祖細(xì)胞及除紅系以外的各系列血細(xì)胞。FL可有效地激發(fā)造血干/祖細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期，因此，對以造血干/祖細(xì)胞為靶細(xì)胞的基因治療具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，由于FL對DC細(xì)胞、NK細(xì)胞及CTL的刺激作用，其在體內(nèi)具有顯著的抗腫瘤作用。此外，F(xiàn)L還有抗病毒、抗細(xì)菌感染的輔助治療，最新研究表明，F(xiàn)L具有顯著的輻射防護(hù)作用。 為了大量制備FL，以及探討FL的生物學(xué)活性，首先，分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞，提取總RNA，采用RT-巢式PCR擴(kuò)增人FLT3配體胞外段基因，以雙脫 重回罩區(qū)大學(xué)習(xí)士研丑生論文 氧終止法進(jìn)行DNA序列分析；將測序正確的目的基因克隆入大腸桿菌融合表達(dá) 載體PRSET－B；重組質(zhì)粒PRSET－B－FL轉(zhuǎn)化大腸桿菌隊(duì)（DE3），用IPTG進(jìn)行 誘導(dǎo)后，收集細(xì)菌，菌體裂解后，利用常壓離子交換色譜的方法對表達(dá)蛋白進(jìn) 行純化，并進(jìn)行 SDS－PAGE及Western－blot檢測． gJ．外周血單核細(xì)胞中克隆得到長462hp的巳胞外段基因，測序正確； 經(jīng) ECORI和 Hjodlll酶切鑒定證實(shí)，F(xiàn)L成功地克隆到表達(dá)載體 pRSET干；構(gòu)建 的表達(dá)載體PRSET－B－FL在大腸桿菌中表達(dá)出相對分子量為24kD的融合蛋白， 經(jīng)常壓離子交換色譜純化后的融合蛋白的純度達(dá)3u90x，該融合蛋白具有n 抗原持性．成功地克隆并表達(dá)了FL基固，并對融合蛋白進(jìn)行了初步純化，為 九規(guī)模獲得FL創(chuàng)造了條件．
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R346

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張穎,劉玉樂,田波;人白細(xì)胞介素11融合蛋白切割位點(diǎn)的改變及成熟蛋白的純化[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2000年01期

2 鄭文婕,劉敬忠,呂星,裴雪濤,孫志賢;重組人Flt3配體在大腸桿菌中的表達(dá)、純化與功能鑒定[J];中華血液學(xué)雜志;2001年06期

本文編號：2742818