【摘要】：乙型肝炎病毒(HBV)宮內(nèi)感染是母嬰傳播的一種主要途徑，也是造成人群中大量HBV攜帶者的原因之一。研究表明，母血中的表面抗原(HBsAg)濃度與宮內(nèi)感染發(fā)生率成正相關(guān)，即母血中的HBsAg濃度越高，宮內(nèi)感染發(fā)生率越高。因而降低母血中的HBsAg濃度對(duì)于降低宮內(nèi)感染發(fā)生率有重要作用。本研究運(yùn)用免疫學(xué)、病理學(xué)和毒理學(xué)的技術(shù)方法，分析HBV轉(zhuǎn)基因(HBVTg)鼠血清中HBsAg濃度在應(yīng)用乙肝疫苗前后的變化，以及應(yīng)用乙肝疫苗對(duì)孕鼠和子鼠的安全性影響，探討應(yīng)用乙肝疫苗孕期治療的可能性，從而為孕期HBV的抗病毒治療提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法①14只HBV Tg雌鼠隨機(jī)分為A、B兩組，12只普通BALB／C雌鼠亦隨機(jī)分為C、D兩組。其中，A組為試驗(yàn)組，B、C和D組為對(duì)照組。②A、C組鼠于孕前3wk和懷孕當(dāng)天分別腹腔注射乙肝疫苗10μg／只，B、D組同時(shí)腹腔注射生理鹽水1mL／只。③4組雌鼠均于首次給藥前、首次給藥3 wk后、首次給藥6 wk后采血3次，并保存血清。每組的子鼠在觀察20 d后解剖處死并保存血清。④記錄4組雌鼠孕期的體重、飲水量及食量，比較各組之間有無(wú)差別。⑤固相免疫放射分析(RIA)血清中的 第叨軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 HBsAg濃度，并經(jīng)重復(fù)測(cè)量分析孕鼠及其子鼠血清中HBSAg濃度 變化。⑥對(duì)A、B組鼠首次給藥前、首次給藥6 wk后的血清進(jìn) 行HBV DNA定量檢測(cè)，并分析兩組的變化。⑦用乙型肝炎病毒 表面抗體診斷試劑盒檢測(cè)A、C組給藥后所收集的兩次血清及其 子鼠的血清，并分析表面抗原抗體(抗一HBs)有無(wú)產(chǎn)生及產(chǎn)生 水平的差異。⑧對(duì)每組的部分孕鼠解剖，連同活胎仔一起進(jìn)行 毒理學(xué)的安全性檢查，比較用藥組與對(duì)照組有無(wú)差別;對(duì)自然 分娩的子鼠進(jìn)行生長(zhǎng)發(fā)育觀察。⑨應(yīng)用HE染色的方法，對(duì)每組 剖解的母鼠的肝、脾、腎及胎盤組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，觀察有 無(wú)組織、細(xì)胞的異常改變。⑩在統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 11 .5中進(jìn)行 單因素方差分析、t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)和重復(fù)測(cè)量分析，在 Mi erosoft Exeel中制圖。 結(jié)果①給藥前A、B、C和D4組母鼠的平均體重分別為25.16 士2.359、25.87士1.219、24.12士2.299和24. 68士1.279，通過 單因素方差分析，4組雌鼠體重總體無(wú)明顯差別(P0 .05)②A、 B兩組HBVTg鼠用藥前的血清HBsAg濃度分別為130.76士 37.89ng/mL和243.07士83.30ng/mL，通過t檢驗(yàn)，兩組之間無(wú)顯 著性差異(P0 .05)。③A、B兩組轉(zhuǎn)基因鼠三次血清的HBsAg平 均濃度按首次用藥前、首次用藥后3 wk、首次用藥后6 wk的順 序分別為A組:130.76士37.89ng/mL、 148.93士41.58ng/mL、 159.36士79.15ng/mL;B組:143.07士83.30ng/mL、195.92士 114.24ng/mL、168.57士112.22ng/mL。經(jīng)重復(fù)測(cè)量分析，A、B 組間因素效應(yīng)無(wú)差異，組內(nèi)三次不同時(shí)間的血清HBsAg濃度均數(shù) 的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，組內(nèi)因素與組間因素亦無(wú)交互效應(yīng) (Pi llai’5 Traee法，P)0.05)。而子鼠中，A組30只有 14只HBsAg 陰性，B組29只中有10只HBsAg陰性。經(jīng)x’檢驗(yàn)，A、B兩組子鼠 HBsAg轉(zhuǎn)陰率無(wú)差異。④A、B組鼠血清中HBV DNA用藥前后變化 不明顯。⑤A、C組鼠首次給藥后3 wk、首次給藥后6 wk均有部 分鼠血清抗一HBs陽(yáng)性，，兩組鼠抗一HBs陽(yáng)性率無(wú)差異(fisher精 3 第叨軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 確檢驗(yàn)，P0 .05)。其子鼠中均未檢測(cè)到抗一HBs。⑥每組鼠孕 12d一孕17d每天飲水量約為9~10ml，孕12d~孕17d的每天食量 約為8一99，各組鼠的飲水量、食量從孕12d一孕17d沒有明顯變 化。體重從孕0d~孕18d每隔2d統(tǒng)計(jì)一次，隨孕期增加呈明顯增 長(zhǎng)，但各組之間的這三個(gè)統(tǒng)計(jì)量無(wú)明顯差異(P0 .05)。⑦解剖 后的孕鼠所懷胎鼠外觀形態(tài)正常，內(nèi)臟檢查、骨骼畸形檢查均 正常。各組孕鼠的黃體數(shù)、胎窩總重、胎盤總重、胎仔總重、 活胎數(shù)的總體均數(shù)比較無(wú)差異(P0 .05)。剩余的各組孕鼠平均 產(chǎn)仔數(shù)分別為A:9只、B:7只、C:8只、D:9只，總體均數(shù)無(wú)差異 (P0.05);胎鼠體重分別為A:1.49、B:1.39、C:1.29、D:1.29， 總體均數(shù)無(wú)差異(P0.05)。⑧各組出生后的子鼠一般健康良好， 行為正常，出生后5d、10d、15d、20d的平均體重總體均數(shù)比較 均無(wú)差異(P0.05)。對(duì)小鼠的張耳天數(shù)、出毛天數(shù)、開眼天數(shù) 紀(jì)錄后統(tǒng)計(jì)，各組小鼠在這三方面的情況基本一致，分別約為 出生后4d、6d、巧d。⑨經(jīng)病理學(xué)檢查，未發(fā)現(xiàn)各組孕鼠的肝、 脾、腎及胎盤組織有異常病理改變。 結(jié)論①孕期注射較大劑量的乙肝疫苗不會(huì)對(duì)小鼠母胎產(chǎn) 生明顯的藥物急性毒副作用。②經(jīng)注射乙肝疫苗，母鼠血清中 HBsAg濃度、HBv DNA未見明顯下降，提示乙肝疫苗用于小鼠孕 期的HBV的治療效果不明顯，但不排除乙肝疫苗作用的時(shí)間較短 或HBv Tg鼠體內(nèi)HBV突變的可能。③無(wú)論是HBv Tg鼠還是普通鼠 都可經(jīng)較大劑量的乙肝疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生相應(yīng)抗體，但其子鼠均未 檢測(cè)到抗一HBs，提示注射rHBv可誘導(dǎo)感染HBV的機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗 體，但抗一HBs能否胎盤到達(dá)胎體還需進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2741958