【摘要】：目的 血管反應(yīng)性異常是內(nèi)毒素血癥時(shí)重要的病理生理改變之一，主要表現(xiàn)為體循環(huán)壓力的下降和早期肺循環(huán)壓力的升高，甚至肺動(dòng)脈高壓（PAH）。正常情況下，由血管內(nèi)皮細(xì)胞固有型一氧化氮合酶（cNOS）催化生成的一氧化氮（NO）是調(diào)節(jié)血管緊張性的主要物質(zhì)；內(nèi)毒素血癥時(shí)，誘生型一氧化氮合酶（iNOS）大量表達(dá)，使NO生成增多,可對(duì)體循環(huán)與肺循環(huán)造成不同影響。目前認(rèn)為，NO及其氧化產(chǎn)物的過(guò)量生成是導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和血管反應(yīng)性異常的重要原因。 硫化氫（H2S）是一種小分子量氣體，是繼NO、CO之后新近發(fā)現(xiàn)的另一種氣體信號(hào)分子，生理狀態(tài)下可由胱硫醚-α-裂解酶（CSE）等催化體內(nèi)半胱氨酸（cysteine）降解產(chǎn)生。其生物學(xué)作用尚未完全明了，在發(fā)病學(xué)中的意義研究更少。已有實(shí)驗(yàn)表明，正常情況下內(nèi)源性H2S可與NO協(xié)同舒張血管和消化道平滑肌；內(nèi)毒素休克（ES）時(shí)，大鼠主、肺動(dòng)脈等多種動(dòng)脈組織產(chǎn)H2S的能力明顯升高。提示，H2S可能參與內(nèi)毒素血癥時(shí)大鼠主、肺動(dòng)脈反應(yīng)性的調(diào)節(jié)，且這一作用的發(fā)揮或許與NO有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)旨在從離體水平觀察內(nèi)毒素血癥時(shí)H2S對(duì)主動(dòng)脈、肺動(dòng)脈血管反應(yīng)性的調(diào)節(jié)作用及其與NO的關(guān)系，以深入探討內(nèi)毒素血癥時(shí)體循環(huán)和肺循環(huán)血管反應(yīng)性變化的發(fā)生機(jī)制。 WP=4 方法 靜脈注射脂多糖（LPS）復(fù)制大鼠內(nèi)毒素血癥模型，隨機(jī)分為2組：正常對(duì)照組：靜脈注射等量生理鹽水（0.5 ml/kg）；LPS組：靜脈注射LPS（5 mg/kg，10 mg/ml）。動(dòng)物分別于給藥2和6小時(shí)后腹腔內(nèi)注射25%烏拉坦（5 ml/kg）麻醉，頸部正中切口分離頸動(dòng)脈，靜脈注射肝素（1 250 U/kg）抗凝后經(jīng)頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物并留取血液標(biāo)本。聯(lián)合取出大鼠心肺，分離并制備離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)(TARs) 和肺動(dòng)脈血管環(huán)（PARs）。將血管環(huán)固定于血管張力測(cè)定裝置的浴槽內(nèi)，用10-6 mol/L苯腎上腺素（PE）預(yù)收縮TARs和PARs至反應(yīng)平臺(tái)，然后測(cè)定：（1）各組TARs和PARs對(duì)硫氫化鈉（NaSH，H2S供體）的累積舒張反應(yīng)曲線；（2）用非選擇性NO合酶抑制劑L-硝基精氨酸（L-NNA）、iNOS抑制劑氨基胍（AG）或NO的供體硝普鈉（SNP）分別預(yù)孵育血管環(huán)20 min后，再測(cè)定各組TARs和PARs對(duì)NaSH舒張反應(yīng)的變化。 取前述留取的血液標(biāo)本，離心后取上清制備血漿，采用吸光度法于酶標(biāo)儀（670 nm）檢測(cè)H2S濃度。 另取健康大鼠胸主動(dòng)脈和肺動(dòng)脈，置于含有不同處理因素和青、鏈霉素的RPMI 1640組織培養(yǎng)基中，在通有5% CO2氣體的37℃孵箱中孵育，隨機(jī)分為4組（1）正常（溶劑）對(duì)照組：組織培養(yǎng)基和生理鹽水溶劑孵育；（2）LPS組：培養(yǎng)基和LPS（終濃度5 μg/ml）孵育；（3）LPS+NaSH組：培養(yǎng)基、LPS（終濃度5 μg/ml）和不同濃度的NaSH（終濃度50、100、150 μmol/L）孵育；（4）NaSH組：培養(yǎng)基和NaSH（終濃度為150 μmol/L）孵育。孵育6小時(shí)后取出，常規(guī)制備HE光鏡標(biāo)本，觀察各組胸主動(dòng)脈和肺動(dòng)脈的結(jié)構(gòu)改變。 WP=5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析在胸主動(dòng)脈和肺動(dòng)脈兩部分中各自比較。數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ±s）表示，給藥前后行配對(duì)t檢驗(yàn)，組間差異用單因素方差分析（one way ANOVA）,有顯著差異者進(jìn)一步用Newman-Kuels q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，以P 0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 內(nèi)毒素血癥大鼠TARs和PARs血管反應(yīng)性的變化 正常對(duì)照組TARs對(duì)PE（10-6 mol/L）產(chǎn)生收縮反應(yīng)，注入LPS 2小時(shí)和6小時(shí)后，TARs對(duì)PE的收縮反應(yīng)與正常對(duì)照組相比明顯降低（P 0.01），其中LPS 6小時(shí)組TARs的收縮反應(yīng)比LPS 2小時(shí)組TARs的收縮反應(yīng)降低更明顯（P 0.01）。正常對(duì)照組TARs可對(duì)NaSH（200-350 μmol/L）產(chǎn)生劑量依賴性的舒張反應(yīng)；LPS可使TARs對(duì)NaSH的最大舒張反應(yīng)百分比明顯升高（P 0.01），其中LPS 6小時(shí)組TARs比LPS 2小時(shí)組TARs升高更明顯（P 0.01）。正常對(duì)照組PARs對(duì)PE產(chǎn)生收縮反應(yīng)，注入LPS對(duì)各組PARs的收縮反應(yīng)無(wú)明顯影響（P 0.05）；正常對(duì)照組PARs對(duì)NaSH（100-350 μmol/L）產(chǎn)生劑量依賴的舒張反應(yīng)，注入LPS后，LPS 2小時(shí)組PARs對(duì)NaSH的最大舒張反應(yīng)百分比較正常對(duì)照組和LPS 6小時(shí)組PARs降低（P 0.05），而正常對(duì)照組PARs與LPS 6小時(shí)組相比無(wú)明顯差別（P 0.05）。 NO在內(nèi)毒素血癥時(shí)TARs和PARs血管反應(yīng)性變化中的作用。 NO在TARs和PARs對(duì)PE收縮反應(yīng)變化中的作用 正常對(duì)照組TARs和PARs用AG（10-4 mol/L）和SNP（10-8 mol/L）預(yù)孵育后對(duì)PE的收縮反應(yīng)變化不明顯（P 0.05）。 WP=6 LPS 2小時(shí)組和LPS 6小時(shí)組的TARs和PARs用AG預(yù)孵育20 min后，對(duì)PE的收縮反應(yīng)與孵育前相比明顯升高（P 0.05或 P 0.01）。用SNP預(yù)孵育20 min后，LPS 2小時(shí)和LPS 6小時(shí)組TARs對(duì)PE的收縮反應(yīng)比孵育前降低（P 0.01）；LPS 2小時(shí)組和LPS 6小時(shí)組PARs對(duì)PE的收縮反應(yīng)比孵育前也降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）。L-NNA（10-4 mol/L）預(yù)孵育20 min后，各組TARs和PARs對(duì)PE的收縮反應(yīng)較孵育前均顯著增加（P 0.01）。 NO在TARs和PARs對(duì)NaSH舒張反應(yīng)中的作用 正常對(duì)照組TARs用L-NNA（10-4 mol/L）預(yù)孵育20 min后，對(duì)NaSH的累積舒張反應(yīng)曲線右移，最大舒張百分比與SNP預(yù)孵育時(shí)相比降低（P 0.05），而與孵育前相比無(wú)明顯變化（P 0.05）；用AG（10-4 mol/L）預(yù)孵育后，與孵育前相
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2738726