【摘要】： 目的 端粒酶是一種特異性核糖核蛋白酶，它復制細胞染色體端粒重復序列TTAGGG，使細胞分裂后縮短的端粒得到補長。絕大多數(shù)永生化細胞和90％以上的惡性腫瘤端粒酶呈高活性，而正常體細胞端粒酶活性極低或缺失。端粒酶具有反轉(zhuǎn)錄功能，以內(nèi)部RNA序列中的11個堿基為模板，識別、結合端粒3’端，并合成、延伸端粒重復序列。端粒酶構成了反義核酸基因治療腫瘤的新靶點。 癌基因C-myc變異可以引起細胞DNA復制及mRNA轉(zhuǎn)錄功能紊亂，使細胞周期調(diào)控失衡，可以導致細胞惡性轉(zhuǎn)化。因此，糾正基因變異可以控制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。 反義核酸可以在介導物作用下，進入細胞，特異性識別、結合靶基因，在復制和轉(zhuǎn)錄水平阻斷異�；虻恼{(diào)控，抑制癌細胞的代謝生長。 本實驗檢測八種肺癌細胞的端粒酶活性。采用硫代修飾型特異性端粒酶RNA反義寡核苷酸、端粒DNA反義寡核苷酸和C-myc反義寡核苷酸，導入端粒酶呈高活性表達的人肺癌LTEP-a-2細胞，探討反義核酸封阻靶基因，抑制癌細胞代謝、生長的作用。 方法 1．培養(yǎng)人肺癌細胞系GLC-82、LTEP-a-2、SPC-a-1、PA-a-1、SCLC、PG-49、801-D和LTEP-78。2．采用Telomerase PCR ELISA方法檢測人肺癌細胞系端粒酶活性。3．設計、合成針對端粒酶RNA、端粒DNA和C-myc基因的硫代磷酸型特異性反義寡核苷酸封條和隨機序列寡核苷酸片段，用Clonfectin包裹反義寡核苷酸導入LTEP-a-2細胞系，作用72小時。4．檢測反義寡核苷酸抑制細胞端粒酶活性；用MTT光吸收法檢測反義寡核苷酸對琥珀酸氧化脫氫酶的抑制情況；觀察分析反義寡核苷酸抑制細胞代謝和增殖的作用。 結 果 1．8種人肺癌細胞系端粒酶活性均為陽性。2．三種針對端粒酶 RNA反義寡核音酸（hTR PS－ODN卜 hTR PS－ODN小 hTR PS－ODN；／、端 粒DNA反義寡核昔酸和C－p c反義寡核苦酸，spo濃度抑制LTEP－aZ細 胞25．7ds34．87％的端粒酶活性；10pM抑制28．39to2．7％端粒酶活性，其中 hTR PS－ODN。抑制 49M％的端粒酶活性，C－IYlyC PS－ODN＊抑制端粒酶活性 率為 62．7％。3．三種hTR PS－ODNS和端粒PS－ODN。，sliM時抑策細胞氧 化脫氫酶活性（SDH）19．4－28％，C－myc PS－ODN口 對 SDH抑制率為 42．38％。 10pM hTR PS－ODNs和端粒PS－ODN。對 SDH抑末率為 25．71－33．87％。C－myc PS－ODN；。對SDH抑擊率達57．78％。4．SPM hTR PS－ODNS、端粒PS－ ODN。抑制細胞增殖為 14．77－－－－28j％，10po hTR PS－ODNS和端粒 PS－ODN。 抑制細胞增殖為 3ds36．92％，C－myc PS0DN；。抑制細胞生長達52．94％。5． 對照隨機序列硫代修飾寡核昔酸20pM僅抑制LTEPa習細胞2．37％端粒酶 活性，抑制氧化脫氫酶活性和細胞增殖分別為4％和4．5％。 結 論人不同肺癌細胞系端粒酶活性均呈陽性。針對端粒酶RNA，端粒 DNA和C－myc靶基因的反義硫代磷酸型寡核昔酸，具有特異性抑制人肺腺 癌細胞端粒酶活性和細胞周期代謝，進而抑制肺癌細胞的生長、增殖。反 義寡核苦酸特異性抑制作用隨藥物濃度升高而增強。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R346

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本文編號：2732919