【摘要】： 目的 端粒酶是一種特異性核糖核蛋白酶，它復(fù)制細(xì)胞染色體端粒重復(fù)序列TTAGGG，使細(xì)胞分裂后縮短的端粒得到補(bǔ)長(zhǎng)。絕大多數(shù)永生化細(xì)胞和90％以上的惡性腫瘤端粒酶呈高活性，而正常體細(xì)胞端粒酶活性極低或缺失。端粒酶具有反轉(zhuǎn)錄功能，以內(nèi)部RNA序列中的11個(gè)堿基為模板，識(shí)別、結(jié)合端粒3’端，并合成、延伸端粒重復(fù)序列。端粒酶構(gòu)成了反義核酸基因治療腫瘤的新靶點(diǎn)。 癌基因C-myc變異可以引起細(xì)胞DNA復(fù)制及mRNA轉(zhuǎn)錄功能紊亂，使細(xì)胞周期調(diào)控失衡，可以導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。因此，糾正基因變異可以控制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。 反義核酸可以在介導(dǎo)物作用下，進(jìn)入細(xì)胞，特異性識(shí)別、結(jié)合靶基因，在復(fù)制和轉(zhuǎn)錄水平阻斷異常基因的調(diào)控，抑制癌細(xì)胞的代謝生長(zhǎng)。 本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)八種肺癌細(xì)胞的端粒酶活性。采用硫代修飾型特異性端粒酶RNA反義寡核苷酸、端粒DNA反義寡核苷酸和C-myc反義寡核苷酸，導(dǎo)入端粒酶呈高活性表達(dá)的人肺癌LTEP-a-2細(xì)胞，探討反義核酸封阻靶基因，抑制癌細(xì)胞代謝、生長(zhǎng)的作用。 方法 1．培養(yǎng)人肺癌細(xì)胞系GLC-82、LTEP-a-2、SPC-a-1、PA-a-1、SCLC、PG-49、801-D和LTEP-78。2．采用Telomerase PCR ELISA方法檢測(cè)人肺癌細(xì)胞系端粒酶活性。3．設(shè)計(jì)、合成針對(duì)端粒酶RNA、端粒DNA和C-myc基因的硫代磷酸型特異性反義寡核苷酸封條和隨機(jī)序列寡核苷酸片段，用Clonfectin包裹反義寡核苷酸導(dǎo)入LTEP-a-2細(xì)胞系，作用72小時(shí)。4．檢測(cè)反義寡核苷酸抑制細(xì)胞端粒酶活性；用MTT光吸收法檢測(cè)反義寡核苷酸對(duì)琥珀酸氧化脫氫酶的抑制情況；觀察分析反義寡核苷酸抑制細(xì)胞代謝和增殖的作用。 結(jié) 果 1．8種人肺癌細(xì)胞系端粒酶活性均為陽(yáng)性。2．三種針對(duì)端粒酶 RNA反義寡核音酸（hTR PS－ODN卜 hTR PS－ODN小 hTR PS－ODN；／、端 粒DNA反義寡核昔酸和C－p c反義寡核苦酸，spo濃度抑制LTEP－aZ細(xì) 胞25．7ds34．87％的端粒酶活性；10pM抑制28．39to2．7％端粒酶活性，其中 hTR PS－ODN。抑制 49M％的端粒酶活性，C－IYlyC PS－ODN＊抑制端粒酶活性 率為 62．7％。3．三種hTR PS－ODNS和端粒PS－ODN。，sliM時(shí)抑策細(xì)胞氧 化脫氫酶活性（SDH）19．4－28％，C－myc PS－ODN口 對(duì) SDH抑制率為 42．38％。 10pM hTR PS－ODNs和端粒PS－ODN。對(duì) SDH抑末率為 25．71－33．87％。C－myc PS－ODN；。對(duì)SDH抑擊率達(dá)57．78％。4．SPM hTR PS－ODNS、端粒PS－ ODN。抑制細(xì)胞增殖為 14．77－－－－28j％，10po hTR PS－ODNS和端粒 PS－ODN。 抑制細(xì)胞增殖為 3ds36．92％，C－myc PS0DN；。抑制細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)52．94％。5． 對(duì)照隨機(jī)序列硫代修飾寡核昔酸20pM僅抑制LTEPa習(xí)細(xì)胞2．37％端粒酶 活性，抑制氧化脫氫酶活性和細(xì)胞增殖分別為4％和4．5％。 結(jié) 論人不同肺癌細(xì)胞系端粒酶活性均呈陽(yáng)性。針對(duì)端粒酶RNA，端粒 DNA和C－myc靶基因的反義硫代磷酸型寡核昔酸，具有特異性抑制人肺腺 癌細(xì)胞端粒酶活性和細(xì)胞周期代謝，進(jìn)而抑制肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖。反 義寡核苦酸特異性抑制作用隨藥物濃度升高而增強(qiáng)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R346

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