本文關(guān)鍵詞：小鼠腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ缺失對部分嗅覺受體和相關(guān)分子表達的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：主要嗅表皮(MOE)結(jié)構(gòu)完整性是嗅覺感知的基礎(chǔ),而氣味誘導(dǎo)的嗅覺神經(jīng)元(ORNs)活動是嗅覺系統(tǒng)形成和維持的關(guān)鍵因素。嗅覺受體(ORs)是神經(jīng)元活動的起點,負(fù)責(zé)結(jié)合氣味分子并向下游傳遞信號。腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ(AC3)是催化生成第二信使cAMP的最主要的酶,在嗅覺通路中位于ORs的下游。AC3敲除小鼠嗅覺能力及嗅覺相關(guān)行為喪失,大量嗅覺相關(guān)基因表達異常。在小鼠生后的發(fā)育過程中,AC3缺失具體如何影響ORs及相關(guān)分子的表達,尚待研究。為了探討AC3缺失與小鼠生后MOE發(fā)育缺陷的關(guān)系,本文采用HE技術(shù)對出生后不同年齡AC3-/-型和AC3+/+小鼠的MOE組織進行染色,觀察AC3缺失對MOE形態(tài)發(fā)育的影響;采用熒光原位雜交(FISH)技術(shù)對AC3-/-和野生型小鼠MOE進行OMP、OR基因的雜交,以明確AC3缺失對ORNs發(fā)育成熟和ORs表達的影響;并對MOE發(fā)育及ORs表達相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子Lhx2和Emx2、轉(zhuǎn)運蛋白RTP、輔助蛋白REEP1以及偶聯(lián)G蛋白輔助因子Ric-8b進行差異表達分析。發(fā)現(xiàn)AC3缺失對MOE組織出生后發(fā)育和OR表達的重要影響。具體內(nèi)容如下:1.AC3缺失導(dǎo)致小鼠出生后至成年的發(fā)育過程中MOE厚度逐漸變薄,成熟ORNs數(shù)量逐漸減少,至小鼠成年時MOE嚴(yán)重受損。2.對AC3-/-小鼠MOE中ORs基因的表達進行分析,發(fā)現(xiàn)ORs在MOE發(fā)育過程中,OR+-ORNs數(shù)量極顯著下調(diào),單個ORNs亮度也明顯減弱,且下調(diào)隨年齡增加漸趨嚴(yán)重,而表達區(qū)域未發(fā)生改變。3.對MOE中Rtp1、Rtp2、Reep1、Lhx2、Emx2和Ric-8b等基因的表達進行分析,AC3缺失后這些嗅覺發(fā)育相關(guān)基因均發(fā)生不同程度的顯著下調(diào)�？傊�,在小鼠出生后,AC3缺失導(dǎo)致MOE形態(tài)結(jié)構(gòu)逐漸缺陷;不同染色體座位和表達分布區(qū)域的ORs顯著下調(diào),降低氣味誘導(dǎo)的神經(jīng)元活動及ORs相關(guān)因子表達下調(diào),這可能是ORs表達下調(diào)和MOE發(fā)育受損的部分原因。本文不僅為研究外圍嗅覺系統(tǒng)的發(fā)育和維持提供基礎(chǔ),也為深入了解嗅覺障礙提供一定理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：嗅覺發(fā)育 MOE AC3 OR 熒光原位雜交
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R339.12
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-13
• 引言13-14
• 第1章 文獻綜述14-27
• 1.1 MOE簡介14-16
• 1.1.1 MOE可終生再生14
• 1.1.2 MOE的結(jié)構(gòu)14-15
• 1.1.3 嗅覺信號的形成15-16
• 1.2 AC3與嗅覺16-18
• 1.2.1 AC3缺失導(dǎo)致嗅覺障礙16-17
• 1.2.2 AC3調(diào)控嗅纖毛模式的建立與維持17-18
• 1.3 OR簡介18-23
• 1.3.1 OR基因的進化、分類與分布18-21
• 1.3.2 OR氣味識別的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)21-23
• 1.4 ORS功能表達相關(guān)輔助因子23-26
• 1.4.1 氣味結(jié)合蛋白OBPs23
• 1.4.2 ORs相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子23-24
• 1.4.3 ORs蛋白表達及功能相關(guān)的輔助因子24-26
• 1.5 本文研究的目的和意義26-27
• 第2章 AC3~(-/-)小鼠MOE形態(tài)發(fā)育的研究27-46
• 2.1 實驗材料與試劑27-31
• 2.1.1 實驗動物27
• 2.1.2 儀器27-28
• 2.1.3 試劑28-29
• 2.1.4 溶液29-31
• 2.2 實驗方法31-39
• 2.2.1 灌流小鼠和取材31
• 2.2.2 制備冷凍切片31-32
• 2.2.3 MOE組織冷凍切片HE染色32-33
• 2.2.4 小鼠MOE組織中總RNA的提取33
• 2.2.5 cDNA的合成33-34
• 2.2.6 基因克隆34-35
• 2.2.7 PCR產(chǎn)物酶切、連接、轉(zhuǎn)化及重組載體提取鑒定35
• 2.2.8 質(zhì)粒線性化及體外轉(zhuǎn)錄35-36
• 2.2.9 探針純化與鑒定36-37
• 2.2.10 原位雜交37-38
• 2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理38-39
• 2.3 實驗結(jié)果39-44
• 2.3.1 不同年齡小鼠MOE的HE染色結(jié)果39-41
• 2.3.2 OMP原位雜交探針制備41-42
• 2.3.3 OMP-FISH42-44
• 2.4 討論44-46
• 第3章 AC3~(-/-)小鼠出生后MOE發(fā)育過程中OR表達的研究46-60
• 3.1 實驗材料與試劑46
• 3.1.1 實驗動物46
• 3.1.2 儀器46
• 3.1.3 試劑46
• 3.1.4 溶液46
• 3.2 實驗方法46-50
• 3.2.1 小鼠MOE組織中總RNA的提取46
• 3.2.2 cDNA的合成46-47
• 3.2.3 qRT-PCR實驗47-48
• 3.2.4 小鼠灌注取材48
• 3.2.5 冷凍切片組織處理與切片48-49
• 3.2.6 基因克隆49
• 3.2.7 PCR產(chǎn)物酶切、連接、轉(zhuǎn)化及重組載體提取鑒定49
• 3.2.8 質(zhì)粒線性化及體外轉(zhuǎn)錄49
• 3.2.9 探針鑒定與純化49
• 3.2.10 原位雜交49-50
• 3.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理50
• 3.3 實驗結(jié)果50-58
• 3.3.1 不同年齡小鼠MOE中OR-FISH結(jié)果50-56
• 3.3.2 OR-FISH結(jié)果統(tǒng)計與分析56-57
• 3.3.3 qRT-PCR檢測AC3~(-/-)小鼠MOE的ORs表達57-58
• 3.4 討論58-60
• 第4章 AC3缺失對MOE內(nèi)嗅覺相關(guān)分子的影響60-64
• 4.1 實驗材料與試劑60
• 4.1.1 實驗動物60
• 4.1.2 儀器60
• 4.1.3 試劑60
• 4.1.4 溶液60
• 4.2 實驗方法60-61
• 4.2.1 小鼠MOE組織中總RNA的提取60
• 4.2.2 cDNA的合成60
• 4.2.3 qRT-PCR實驗60-61
• 4.3 實驗結(jié)果61-62
• 4.3.1 AC3缺失引起OR相關(guān)基因的差異表達61-62
• 4.4 討論62-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻65-73
• 致謝73-74
• 讀研期間發(fā)表的論文74

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  本文關(guān)鍵詞：小鼠腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ缺失對部分嗅覺受體和相關(guān)分子表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：273001