【摘要】： 目的 氧應(yīng)激是指細(xì)胞受到活性氧種所致的細(xì)胞毒作用。在中 樞神經(jīng)系統(tǒng)中，許多退行性疾病都涉及到氧應(yīng)激，而MnSOD在抗 氧應(yīng)激中具有重要的作用。為了研究MnSOD在神經(jīng)細(xì)胞中的抗氧 應(yīng)激作用，由于PC12細(xì)胞具有一定的神經(jīng)元的特性，所以本實驗 研究選用PC12細(xì)胞作為研究對象，將MnSOD基因?qū)爰?xì)胞中， 使之在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達，然后觀察H_2O_2對基因修飾后PC12細(xì)胞 的細(xì)胞毒性作用變化，揭示MnSOD在H_2O_2對PC12細(xì)胞的細(xì)胞毒 中的作用，為以后研究神經(jīng)系統(tǒng)疾病打下基礎(chǔ)，為防治腦氧應(yīng)激損 傷提供依據(jù)。方法 通過基因轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達人正義和反義MnSOD 的PC12細(xì)胞，用低濃度的H_2O_2攻擊各細(xì)胞系，采用MTT法、流 式細(xì)胞儀檢測和Hoechest染色方法研究H_2O_2的細(xì)胞毒作用。采用 RT-PCR的方法檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞APP的表達情況。結(jié)果 發(fā)現(xiàn)低濃度 的H_2O_2（50μM、100μM）對PC12細(xì)胞的細(xì)胞毒作用是通過誘導(dǎo) 其凋亡，流式細(xì)胞儀測試可見在G1峰左側(cè)出現(xiàn)一個亞二倍體細(xì)胞 群峰型。Hoechst 33258染色見細(xì)胞核呈濃染致密的顆粒狀熒光， 而且有核碎裂的征象。轉(zhuǎn)染正義和反義MnSOD的細(xì)胞的MnSOD 酶活性分別比原細(xì)胞提高了1倍和降低約70％；轉(zhuǎn)染正義MnSOD 的細(xì)胞具有抑制H_2O_2誘發(fā)的PC12細(xì)胞的調(diào)亡作用，而轉(zhuǎn)染反義 MnSOD的細(xì)胞使之更敏感。RT-PCR的結(jié)果顯示MnSOD對APP 的表達無明顯影響。結(jié)論 MnSOD具有抑制H_2O_2對PC12細(xì)胞的 凋亡作用，也表明H_2O_2誘導(dǎo)PC12的凋亡作用可能涉及到損傷細(xì) 胞的線粒體，導(dǎo)致氧化還原失衡繼而誘發(fā)細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2000
【分類號】：R363

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 鄧碧玉,袁勤生,李文杰;改良的連苯三酚自氧化測定超氧化物歧化酶活性的方法[J];生物化學(xué)與生物物理進展;1991年02期

2 夏奕明;朱蓮珍;;血和組織中谷胱甘肽過氧化物酶活力的測定方法 Ⅰ.DTNB直接法[J];衛(wèi)生研究;1987年04期

本文編號：2719666