【摘要】：目的：構建含有凋亡抑制因子Svv基因的原核表達載體，并轉化大腸桿菌，，誘導表達出目的蛋白后，用原核表達產(chǎn)物作為抗原制備單抗。 方法：(1)以RT-PCR方法擴增目的基因，擴增產(chǎn)物純化后克隆至測序載體pGEM-T-easy，挑取陽性克隆經(jīng)鑒定后測序。將測序正確的目的基因Svv克隆至pRSET-c表達載體的多克隆位點間，構建含有目的基因的表達載體，pRSET-c-Svv。(2)利用基因工程技術，用重組質粒pRSET-c-Svv轉化大腸桿菌BL21，經(jīng)IPTG誘導后，表達目的蛋白。(3)將純化后的目的蛋白制備成抗原，免疫Balb／c小鼠，取小鼠脾細胞與Sp2／0小鼠骨髓瘤細胞進行細胞融合，建立雜交瘤細胞系，采用ELISA檢測上清中抗體蛋白的分泌表達。 結果：(1)經(jīng)測序，限制性酶切分析及PCR方法鑒定，目的基因被插入表達載體中，成功構建原核表達載體。(2)經(jīng)SDS-PAGE鑒定，轉化后的大腸桿菌，高效表達目的基因蛋白。(3)融合后的雜交瘤細胞，經(jīng)間接ELISA法鑒定，獲得的4個陽性反應孔。至此，初步制備Svv蛋白的 第四軍醫(yī)大學碩士學位論文 單抗。雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)及單抗的全面鑒定，還將繼續(xù)進行。 結論:抗凋亡因子S。的成功克隆、原核表達蛋白的獲得及其單克 隆抗體的制備，為S。蛋白的細胞凋亡調控功能、在腫瘤細胞選擇性表 達機理等的深入研究提供了部分實驗基礎，也為腫瘤的荃因治療提供了新 思路。尤其是單克隆抗體的成功制備，在腫瘤診斷和治療方面將有一定潛 在的臨床應用價值。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R346

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張化蓮;張梅月;周愛青;;奧沙利鉑誘導survivin表達改變與宮頸癌細胞化療敏感性的關系[J];腫瘤基礎與臨床;2006年06期

2 史惠蓉,喬玉環(huán),李克虹,劉鴻霞,陳亞麗,張欽憲;Survivin反義核酸對拓撲替康誘導SKOV3細胞凋亡的影響[J];鄭州大學學報(醫(yī)學版);2004年04期

3 蔣清清,薛敏;survivin與婦科腫瘤[J];醫(yī)學臨床研究;2005年08期

4 戴菁池;曹明富;;抗腫瘤藥物誘導細胞凋亡的分子機制研究進展[J];杭州師范學院學報(醫(yī)學版);2007年01期

5 嚴玉霞;蔣建偉;曹明溶;吳志慧;林春蘭;丁文婷;陳妙巧;;聚乙烯亞胺介導的生存素反義核酸提高肝癌細胞對化療藥物的敏感性[J];暨南大學學報(醫(yī)學版);2007年02期

6 張玉清;凋亡抑制因子—Survivin最新研究進展[J];江西醫(yī)學院學報;2003年03期

7 王井偉;田海梅;劉義;張偉;;Survivin-siRNA對骨肉瘤MG-63細胞藥物敏感性的研究[J];軍醫(yī)進修學院學報;2010年01期

8 王遠濤;李曉強;;生存素在腫瘤研究中的進展[J];華北煤炭醫(yī)學院學報;2006年05期

9 鄭建波;劉忠;;Survivin與胃癌研究進展[J];現(xiàn)代實用醫(yī)學;2009年11期

10 張苗尊;李明主;顧昕;;肝內膽管結石上皮Survivin表達與肝內膽管細胞癌關系的研究[J];現(xiàn)代實用醫(yī)學;2011年09期

相關博士學位論文 前10條

1 楊欣艷;人胃癌中Survivin基因的克隆與功能研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2002年

2 周彩虹;金安粉針劑誘導肺癌細胞凋亡及其分子機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2003年

3 孟化;胃癌中Survivin轉錄變異體的表達、及其與細胞增殖、凋亡、患者預后和化療藥物耐受的相關性研究[D];浙江大學;2004年

4 劉江偉;COX-2抑制劑與Survivin反義寡核苷酸聯(lián)合應用對胰腺癌細胞增殖、凋亡的影響及其相關機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2004年

5 成勝權;Survivin基因對人肝癌細胞增殖和凋亡作用機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2004年

6 王舉;Survivin在原發(fā)性肝癌中的表達及其靶向反義寡核苷酸對肝癌細胞的影響[D];吉林大學;2004年

7 劉德權;Survivin反義寡核苷酸對人乳腺癌細胞增殖、凋亡影響的研究[D];昆明醫(yī)學院;2004年

8 史惠蓉;Survivin在卵巢癌中的表達及其反義核酸誘導卵巢癌細胞凋亡的實驗研究[D];鄭州大學;2004年

9 高曉康;survivin基因在腎透明細胞癌中的表達及survivin反義寡核苷酸對786-O細胞生物學行為的影響[D];第四軍醫(yī)大學;2005年

10 高大新;Survivin基因在骨肉瘤中表達效應與干預治療的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學;2005年

相關碩士學位論文 前10條

1 趙震宇;Survivin shRNA促進HL-60細胞凋亡及其對阿糖胞苷敏感性的研究[D];昆明醫(yī)學院;2011年

2 魏建國;siRNA干擾Survivin對人胃癌SGC-7901細胞的影響[D];南華大學;2011年

3 李妍;乳腺癌Survivin、BCRP基因表達與新輔助化療TE方案的療效相關性研究[D];新疆醫(yī)科大學;2011年

4 朱侃;阿托伐醌類似物的設計、合成及其抗腫瘤活性研究[D];南京師范大學;2011年

5 方海艷;選擇復制性腺病毒M4對卵巢癌細胞系體外治療作用及機制的初步探討[D];華中科技大學;2011年

6 鄭劍;PTEN、Livin基因表達與食管鱗癌化療藥物敏感性的相關性研究[D];泰山醫(yī)學院;2010年

7 仲海艷;Ad-PTEN對胃癌的抑瘤效應和化療增敏效應及分子機制的研究[D];蘇州大學;2011年

8 劉強;大腸癌發(fā)生過程中Survivin的表達及其與凋亡、增殖、血管生成的關系[D];蘇州大學;2003年

9 趙君寧;胃癌中survivin的表達及其與COX-2相關性的研究[D];南京醫(yī)科大學;2004年

10 張玉清;Survivin在胰腺癌中的表達及其與Bcl-2表達相關性的初步研究[D];武漢大學;2004年

本文編號：2711004