【摘要】：纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)信號(hào)通路在機(jī)體發(fā)育,成體組織的血管生成和創(chuàng)傷修復(fù)及腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮著重要的作用。FGF通過結(jié)合細(xì)胞表面的FGF受體,使其二聚化并自體磷酸化,活化后的FGF受體具有酪氨酸激酶活性,進(jìn)而活化胞內(nèi)下游多條信號(hào)通路。其中較為重要的是 Ras-MAPK激酶通路。 活化的FGFR通過Grb2激活Ras,然后Raf,MEK,ERK自上而下依次活化,最后活化的ERK轉(zhuǎn)位入核,調(diào)控下游基因的表達(dá)。 過量或者不適當(dāng)?shù)腇GF信號(hào)會(huì)導(dǎo)致某些癌癥的發(fā)生以及發(fā)育過程的紊亂。因此,在正常生理?xiàng)l件下,FGF信號(hào)的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間必須受到嚴(yán)格的調(diào)控。Sef(Similar expression to fgf genes)是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)FGF信號(hào)通路的抑制因子,它最初是從斑馬魚胚胎文庫(kù)中分離出來,與FGF8等基因在斑馬魚胚胎相同的區(qū)域表達(dá),并且對(duì)FGF信號(hào)通路起抑制作用。鼠源Sef(mSef)基因也相繼被克隆出來,過量表達(dá)的mSef抑制FGF誘導(dǎo)的3T3細(xì)胞的增殖,同時(shí)伴有FGF受體磷酸化水平的降低。隨后人源Sef(hSef)基因被克隆出來,并發(fā)現(xiàn)其對(duì)FGF誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的分化起抑制作用。但對(duì)hSef在各種組織及細(xì)胞系中的表達(dá)分析還沒有詳盡報(bào)道。 本文將人源Sef蛋白胞內(nèi)區(qū)編碼序列與GST融合構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行重組蛋白的表達(dá)與純化并制備多抗。在Cos-7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染表達(dá)hSef顯示其分子量分別為80KD,100KD,比體外翻譯的分子量偏大,暗示有糖基化存在。Northern印跡的結(jié)果表明,hSef主要表達(dá)在人腎和睪丸組織。免疫組化的結(jié)果顯示,hSef在人腎和睪丸及相應(yīng)癌組織表達(dá)水平較高。RT-PCR檢測(cè)到Sef在眾多細(xì)胞系有廣泛的表達(dá)。
【圖文】：

FR-HLGAG 復(fù)合體的簡(jiǎn)化模型。引自 Venkatat al. (1999) 的激活和信號(hào)的啟動(dòng) FGF 后，形成二聚體，并磷酸化自身和些殘基能夠募集含有 Src 同源物 2（SH2 100 個(gè)氨基酸殘基，SH2 結(jié)構(gòu)域特異性的 3-6 個(gè)氨基酸殘基[7]，含有 SH2 結(jié)構(gòu)域的白。這些蛋白在和 FGFR 結(jié)合后構(gòu)象發(fā)生而適配蛋白則募集其他具有酶活力的靶蛋鏈傳遞下去，最終導(dǎo)致細(xì)胞的響應(yīng)。 為例，胞內(nèi)區(qū)共有 7 個(gè)酪氨酸殘基：Tyr46，其中 Tyr653、654 在 FGFR1 的激酶結(jié)

要的信號(hào)系統(tǒng)，這條通路中的蛋白，尤其是 Raf 和多種蛋白有相互作用因此受到廣泛的調(diào)節(jié)。還有其他一些蛋白被 FGFR 活化，這里就不一一贅述了，F(xiàn)GF 信號(hào)路的活化最終導(dǎo)致了細(xì)胞的增殖，，遷移和分化等多種效應(yīng)。下面是 FGF信號(hào)通路的示意圖。
【學(xué)位授予單位】：清華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R33

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本文編號(hào)：2693540