【摘要】： 目的 構建反義CD40 RNA真核表達載體，轉染健康人及SLE患者的B細胞系，鑒定其抑制B細胞CD40表達的能力，并研究B細胞在CD40被抑制以后增殖能力、抗體分泌的改變，開辟一條利用反義CD40 RNA抑制B淋巴細胞異�；罨耐緩剑瑸檠芯緽淋巴細胞功能異常所引起的自身免疫性疾病的發(fā)病機制及其治療提供理論依據(jù)。 方法 從健康人外周血單個核細胞提取總RNA，利用RT-PCR擴增CD40部分序列，用T-A克隆技術形成PCR產物的克隆CD40／pUCm-T，并進行基因測序。根據(jù)測序結果，應用亞克隆技術反向接入真核表達載體pcDNA3，構建成目的基因片段／載體重組體-CD40／pcDNA3。雙酶切法進行鑒定，并利用T7引物鑒定重組體CD40／pcDNA3的方向。以脂質體為介質瞬時轉染健康人及SLE患者B細胞系，利用流式細胞技術檢測膜CD40的表達情況，并利用MTT比色法檢測細胞的增殖能力，，ELISA法檢測培養(yǎng)液的Ig濃度，以研究B細胞在CD40被抑制以后增殖能力、抗體分泌的改變。 結果 1、人反義CD40 RNA真核表達載體經(jīng)雙酶切檢驗證明構建成功，T7引物證明CD40片段為反向插入。2、與轉染pcDNA3空載體組或未轉染質粒組相比較，轉染CD40／pcDNA3的健康人及SLE患者B細胞系CD40的表達均明顯減少，增殖能力明顯下降，Ig的分泌受到明顯抑制。 結論 成功構建了人反義CD40 RNA真核表達載體CD40／pcDNA3，此載體可有效的抑制健康人及SLE患者B細胞系CD40分子的表達，并抑制兩者的增殖及抗體分泌。CD40基因在B細胞的生長代謝、抗體分泌中起著重要作用，反義RNA技術可作為一種有效的免疫調控手段。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R392.1

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