本文關(guān)鍵詞：HCMV皮層蛋白pUL76非保守C端與染色體損傷的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究通過構(gòu)建人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)皮層蛋白pUL76的保守N端和非保守C端的真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染至真核細(xì)胞,確定pUL76引起染色體損傷的決定序列。方法:通過PCR方法獲取HCMV AD169株UL76基因的全長,保守N端和非保守的C端的編碼序列并在擴(kuò)增產(chǎn)物的兩端分別加上BamHI和HindⅢ限制性酶切位點(diǎn),然后構(gòu)建至綠色熒光蛋白表達(dá)載體pEGFP-N1。構(gòu)建的重組質(zhì)粒分別命名為pEGFP-UL76,pEGFP-UL76N,pEGFP-UL76C。將構(gòu)建的質(zhì)粒通過雙酶切和測序驗(yàn)證后分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞和HF細(xì)胞,IFA檢測不同轉(zhuǎn)染組染色體損傷信號γ-H2AX與綠色熒光蛋白的共定位情況,WB檢測不同轉(zhuǎn)染組染色體損傷信號γ-H2AX的相對表達(dá)量。彗星實(shí)驗(yàn)檢測不同轉(zhuǎn)染組細(xì)胞染色體損傷狀況。結(jié)果:1.雙酶切和測序結(jié)果顯示pUL76全長、保守N端和非保守的C端編碼序列均正確克隆至真核表達(dá)載體pEGFP-N1,用EGFP抗體做WB顯示各片段均正確表達(dá)。2.單獨(dú)轉(zhuǎn)染pUL76全長或非保守C端,IFA結(jié)果顯示γ-H2AX與EGFP融合蛋白共定位,且WB結(jié)果顯示γ-H2AX相對表達(dá)量較轉(zhuǎn)染空載體(pEGFP-N1)對照組上升差異有顯著性。單獨(dú)轉(zhuǎn)染pUL76保守N端,γ-H2AX與EGFP融合蛋白不出現(xiàn)共定位現(xiàn)象,WB結(jié)果顯示γ-H2AX相對表達(dá)量較轉(zhuǎn)染空載體(pEGFP-N1)對照組上升差異沒有顯著性。3.單獨(dú)轉(zhuǎn)染pUL76全長或非保守C端,彗星實(shí)驗(yàn)顯示出現(xiàn)染色體損傷的細(xì)胞比例明顯上升,而單獨(dú)轉(zhuǎn)染pUL76保守N端,出現(xiàn)染色體損傷的細(xì)胞比例變化較對照組無明顯差異。4.單獨(dú)轉(zhuǎn)染pUL76全長或非保守C端細(xì)胞內(nèi)熒光信號主要集中在核內(nèi),且綠色熒光信號聚集成斑塊樣;而單獨(dú)轉(zhuǎn)染空載體或pUL76保守N端細(xì)胞內(nèi)熒光信號均勻分布整個細(xì)胞,不出現(xiàn)聚集現(xiàn)象。結(jié)論:UL76非保守C端是引起染色體損傷的決定區(qū)域。
【關(guān)鍵詞】：人巨細(xì)胞病毒 皮層蛋白 UL76 染色體損傷
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-17
• 材料方法17-24
• 結(jié)果24-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 附錄一:個人簡歷42-43
• 附錄二:致謝43-44
• 綜述44-52
• 參考文獻(xiàn)49-52

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1 T.C.Hsu William Au;李昌本;;化學(xué)誘變劑對染色體的作用[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;1980年02期

2 朱炳富,鄧承宗,賀維順,劉愛華;苯與染色體損傷的關(guān)系[J];自然雜志;1979年07期

3 鮑虹,鄭斯英;熟前染色體凝集技術(shù)在輻射研究中的應(yīng)用[J];自然雜志;1990年08期

4 金玉坷，蔡露，王獻(xiàn)理，劉麗波;電離輻射致小鼠生殖細(xì)胞染色體損傷及其防護(hù)作用的研究[J];癌變.畸變.突變;1995年04期

5 楊新海，，饒用清;以PCC技術(shù)分析染色體輻射損傷的修復(fù)[J];輻射研究與輻射工藝學(xué)報(bào);1996年02期

6 Kaplan JC ,陳火勝;人類第22號染色體[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊;1988年02期

7 沈光平;溫度條件對染色體損傷修復(fù)的影響[J];遺傳;1986年06期

8 張中庸;吳學(xué)清;馬素貞;;實(shí)驗(yàn)中毒性動物染色體的畸變[J];新疆八一農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào);1981年02期

9 劉鵬;徐遲默;羅微;周開兵;;增強(qiáng)UV-B輻射對芒果離體葉片染色體的損傷[J];植物生理學(xué)報(bào);2012年02期

10 楊新海，饒用清;早熟染色體凝集技術(shù)研究~3H-TdR摻入CHL細(xì)胞染色體的損傷[J];中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志;1994年01期

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1 夏昭林;王琪;許艷丹;譚紅汕;周莉芳;孫原;邵華;朱怡良;;基于染色體損傷的基準(zhǔn)劑量與氯乙烯接觸工人職業(yè)接觸限值探討[A];第二十屆海峽兩岸及香港、澳門地區(qū)職業(yè)安全健康學(xué)術(shù)研討會暨中國職業(yè)安全健康協(xié)會2012學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

2 馬龍;張?jiān)旅?;新疆哈薩克族常用食品誘發(fā)離體動物細(xì)胞染色體損傷的研究[A];中國營養(yǎng)學(xué)會營養(yǎng)與腫瘤學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];1990年

3 吳若菁;吳惠平;杜惠東;;亞硫酸氫鈉對泥鰍紅細(xì)胞染色體損傷及其相關(guān)關(guān)系研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2005年學(xué)術(shù)大會、青年學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

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1 焦?jié)?基因多態(tài)與氯乙烯作業(yè)工人染色體損傷風(fēng)險(xiǎn)[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

2 仇玉蘭;氯乙烯接觸工人染色體損傷的遺傳易感性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

3 王亞東;ATM基因變異與多環(huán)芳烴暴露致染色體損傷遺傳易感性及分子機(jī)制研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2010年

4 王威;基因多態(tài)對氯乙烯接觸工人染色體損傷的修飾[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

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1 王金瑋;氯乙烯作業(yè)工人代謝酶基因甲基化與染色體損傷[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 張文昌;HCMV皮層蛋白pUL76非保守C端與染色體損傷的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

3 孫原;氯乙烯作業(yè)工人染色體損傷及其損傷修復(fù)能力研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

4 周莉芳;苯作業(yè)工人染色體損傷與細(xì)胞周期調(diào)控基因多態(tài)性關(guān)系[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

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