發(fā)布時間：2017-03-25 18:06

  本文關(guān)鍵詞：防齲DNA疫苗pVAX1-SG在小鼠體內(nèi)分布和表達規(guī)律的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察口服型防齲DNA疫苗pVAX1-SG經(jīng)灌胃途徑免疫BALB/c小鼠后目的基因在各組織器官的分布和表達,為評價防齲效果提供理論依據(jù)。方法:66只BALB/c小鼠,6-8周齡健康雌性,體重18-22g,隨機分為實驗組30只,空載體對照組和空白對照組各18只。重組質(zhì)粒pVAX1-SG和空載體質(zhì)粒pVAX1的鑒定和大量抽提。經(jīng)溫敏型水凝膠包裹重組質(zhì)粒pVAX1-SG制備免疫用口服型防齲DNA疫苗。實驗組經(jīng)灌胃途徑接種包裹溫敏型水凝膠的重組質(zhì)粒pVAX1-SG,空載體對照組經(jīng)灌胃途徑接種包裹溫敏型水凝膠的空載體質(zhì)粒pVAX1,空白對照組不做任何處理。共免疫2次,每次間隔2周,免疫劑量為每次100μg。于小鼠第2次免疫后的第1,2,7,15,30,60天,分別稱重,后處死小鼠,取小鼠的心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、頜下腺、小腸、生殖器官,利用實時熒光定量PCR檢測各組織器官中pVAX1-SG的分布及表達情況。取小鼠第2次免疫后第60天的心、肝、脾、肺、腎、和小腸進行組織病理學(xué)檢查。取小鼠第2次免疫后第7天小腸與頜下腺組織,免疫組織化學(xué)二步法檢測免疫部位小腸組織和頜下腺組織的目的蛋白表達情況。結(jié)果:1:經(jīng)實時熒光定量PCR檢測,給藥后第1-60天在小鼠體內(nèi)均可檢測到pVAX1-SG的DNA,但各個組織器官間的DNA拷貝數(shù)分布存在差異,免疫后第1天pVAX1-SG分布最多的器官是生殖器官,為(3.08E+08)±(0.92E+08)拷貝數(shù)/ml,第2天是肝臟,為(2.31E+09)±(0.18E+09)拷貝數(shù)/ml,第7天和第15天是心臟,分別為(3.49E+07)±(0.27E+07)拷貝數(shù)/ml和(7.96E+07)±(0.54E+07)拷貝數(shù)/ml,第30天是頜下腺,為(9.32E+08)±(0.27E+08)拷貝數(shù)/ml,第60天則是脾臟,為(3.49E+07)±(0.27E+07)拷貝數(shù)/ml。2:給藥后pVAX1-SG在小鼠體內(nèi)各器官組織間都有表達,隨時間推移,各器官組織間的mRNA相對表達量發(fā)生改變和下降,免疫后第1天pVAX1-SG的表達主要集中在脾臟和小腸(P0.05),第2天富集在肝臟,小腸和生殖器官(P0.05),第7天集中在肝臟和頜下腺(P0.05),第15天集中在小腸(P0.05),第30,60天小鼠體內(nèi)各器官組織mRNA相對表達量全面降低。3:在免疫動物的小腸和頜下腺相關(guān)細胞中觀察到重組蛋白的表達。4:與對照組比較,動物體重?zé)o明顯差異,各組實驗動物的重要器官組織病理切片觀察,未發(fā)現(xiàn)明顯病理改變。結(jié)論:1:口服型防齲DNA疫苗pVAX1-SG經(jīng)灌胃途徑免疫BALB/c小鼠后各組織器官中均能檢測到重組質(zhì)粒pVAX1-SG的分布與表達,但溫敏型水凝膠包裹重組質(zhì)粒pVAX1-SG的分布與表達不以同步的形式出現(xiàn),提示該重組質(zhì)粒pVAX1-SG基因表達有其時空性。2:口服型防齲DNA疫苗pVAX1-SG經(jīng)灌胃途徑免疫后免疫部位小腸和效應(yīng)部位頜下腺都可以檢測到目的蛋白的表達,心、肝、脾、肺、腎和免疫部位小腸未出現(xiàn)明顯病理改變,提示重組質(zhì)粒pVAX1-SG能夠在小鼠體內(nèi)表達,口服型防齲DNA疫苗pVAX1-SG免疫小鼠后未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性作用。
【關(guān)鍵詞】：DNA疫苗 齲病 SpaP GTFs 時空表達性
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392-33
【目錄】：

• 研究中英縮略詞對照表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 實驗一 重組質(zhì)粒 p VAX1-SG 和空載體 p VAX1 的鑒定和大量抽提12-17
• 材料與方法12-14
• 結(jié)果14-16
• 討論16-17
• 實驗二 防齲 DNA 疫苗 p VAX1-SG 在小鼠體內(nèi)分布與表達情況研究17-43
• 材料與方法17-24
• 結(jié)果24-40
• 討論40-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-47
• 綜述47-59
• 參考文獻56-59
• 致謝59-60
• 作者簡介60-61
• 附表61-65

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