【摘要】： 毛囊作為皮膚重要的附屬器官，它在皮膚的自我更新、毛發(fā)的生長和皮膚腫 瘤的發(fā)生上起重要的作用。在燒傷治療領域，深度燒傷創(chuàng)面的愈合主要依靠殘存 附件尤其是毛囊細胞的增殖。但臨床上深度燒傷創(chuàng)面即使自行愈合其結局也常表 現(xiàn)為無毛瘢痕愈合，而大面積燒傷創(chuàng)面的愈合更因為缺乏種子細胞而只能行自體 和異體皮膚移植。毛囊干細胞的發(fā)現(xiàn)對于尋求促進燒傷創(chuàng)面完全修復的手段和構 建人工皮膚具有重要的意義。 但對于毛囊器官和毛囊細胞的研究仍存在許多問題：①毛囊生長的影響因 素和毛囊周期的調控機制尚不完全清楚。②毛囊干細胞的定位研究雖有一定進 展，但其分離、培養(yǎng)和鑒定尚未取得突破。③具有高度增殖能力的外根鞘細胞 在體外培養(yǎng)卻較困難，限制了對它的生物學特性的研究。④毛乳頭在毛發(fā)生長 過程中具有重要作用，可否利用培養(yǎng)的毛乳頭細胞來誘導毛發(fā)再生？⑤臨床上 尚缺乏十分有效的藥物能促進燒傷創(chuàng)面達到包括皮膚及附屬器官毛囊、汗腺完全 修復（有毛愈合）。 針對以上問題我們在本實驗中初步作了以下工作：①首先觀察了頭皮及頭 皮毛囊的組織結構特征。②通過免疫組化方法了解頭皮和毛囊中幾種角蛋白的 分布，以了解不同部位上皮細胞的增殖特性，初步判定干細胞的定位。③進行 了游離毛囊的器官培養(yǎng)，并比較了不同培養(yǎng)基對毛囊培養(yǎng)的影響。④通過分段毛 囊培養(yǎng)觀察毛囊的再生情況。⑤分別利用組織法和消化法進行了毛囊外根鞘細 胞的培養(yǎng)，為探索干細胞的培養(yǎng)方法奠定基礎。⑥我們首次系統(tǒng)地從細胞生長 曲線、不同亞型角蛋白表達、細胞超微結構、細胞周期等幾個方面初步研究了培 養(yǎng)的外根鞘細胞的生物學特性，并與皮膚角朊細胞作了比較。⑦進行了毛乳頭 細胞的培養(yǎng)、鑒定、傳代、凍存。⑧觀察了促毛發(fā)再生藥物米諾地爾對培養(yǎng)的 外根鞘細胞、成纖維細胞的作用。 — — 實驗結果如下： ①頭皮中含有大量的毛囊、皮脂腺和汗腺等附屬器，毛囊上皮豐富，細胞 數(shù)目眾多，分化程度低。 ②頭皮石蠟切片免疫組化染色結果顯示 CK主要分布在毛囊隆突部，部分 毛囊外根鞘最外層也有一定的表達；CK19主要分布汗腺，毛囊外根鞘最外層和 皮膚的基底層；比m在表皮層和毛囊外根鞘均有陽性表達：比I口主要分布在頭 皮表皮的基底上層和皮脂腺腺泡的最外層。 ③成功進行了游離毛囊的器官培養(yǎng)，并發(fā)現(xiàn)使用含血清DMEM培養(yǎng)基毛囊 生長速度較慢，扭曲變形早；而使用無血清DMEM培養(yǎng)基毛囊的生長天數(shù)明顯 延長，毛囊的層次結構及形態(tài)可長時間保持不變，但前3天生長速度與有血清培 養(yǎng)時無明顯差異；使用 illiams E培養(yǎng)基毛囊在前3天生長速度明顯加快，更 加適合于毛囊的培養(yǎng)。 ④通過橫斷毛囊培養(yǎng)我們發(fā)現(xiàn)切除毛球部或毛囊下1／3后可以再生出毛球樣 結構，形成形態(tài)近似完整、并可以繼續(xù)生長的毛囊，而切除毛囊下1／2后未見毛 囊生長。 ⑤利用組織法或消化法培養(yǎng)毛囊外根鞘細胞，不使用滋養(yǎng)層細胞，培養(yǎng)方法 較簡單，獲得的細胞克隆形成能力強，至少可以傳8代以上，第2代復蘇成活率 達95％以上，第3代復蘇成活率約為she。 ③從細胞生長的動態(tài)觀察和描繪的生長曲線上來看毛囊外根鞘細胞增殖速度 快，克隆形成能力強，倍增時間較皮膚角骯細胞短；免疫組化結果顯示培養(yǎng)的毛 囊外根鞘細胞表達CK19、CK16等低分子量角蛋白，但不表達CK10和CK15；細 胞超微結構顯示原代培養(yǎng)外根鞘細胞表面形態(tài)多變，細胞體積較表皮細胞稍小， 核多為圓形，以常染色質為主，常染色質密度均勻，細胞器種類少，細胞內游離 核糖體和糖原較頭皮角骯細胞更加豐富，張力微絲較頭皮角阮細胞少，未見透明 角質顆粒，細胞膜表面有大量微絨毛，局部細胞膜凹陷成細胞內囊樣結構，細胞 間未見明顯細胞連接形成。流式細胞儀結果顯示毛囊外根鞘細胞G；期細胞的比 例較包皮表皮細胞更高，而S期和 G。期細胞比例較小。 ①利用DISpe酶和膠原酶分離毛乳頭可以成功培養(yǎng)毛乳頭細胞，，并經(jīng)細胞 化學染色證實。倒置顯微鏡下毛乳頭細胞呈成纖維細胞形態(tài)，具有層聚特性，細 胞生長速度快，可傳 15代以上，10代以內細胞凍存之后復蘇成活率達 sob以上。 ．卜 第口軍匡太學矚士學住訟文 ③通過MU法和3H－TdR摻入法分別檢測了不同濃度米諾地爾對ORSC和成纖 維細胞細胞增殖和DNA合成的影響，發(fā)現(xiàn)0．oleq．05oh的米諾地爾對外根鞘細胞 具有明顯的促增殖作用，而0．ldi以上的粕地爾則對外根鞘細胞的增殖產生毒 性作用。米諾地爾對成纖維細胞的增殖具有一定的
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2001
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

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2 沈丹蓓,夏隆慶;角質形成細胞體外培養(yǎng)技術及應用的進展[J];國外醫(yī)學.皮膚性病學分冊;2000年02期

3 伍津津,劉榮卿,葉慶佾,唐書謙,鐘白玉;人頭皮游離毛囊培養(yǎng)[J];中華皮膚科雜志;1996年04期

本文編號：2672153