【摘要】：目的: 觀察尼古丁對T淋巴細(xì)胞亞群CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞分化的影響，以及對CD4+細(xì)胞中Th1、Th2細(xì)胞分化的影響，為尼古丁對免疫系統(tǒng)的作用提供進(jìn)一步的證據(jù)。方法:（1）20只6－8周的BALB/C雌性小鼠隨機分為4組：對照組、1.5mg組、3.0 mg組和6.0 mg組。對照組小鼠腹部皮下注射生理鹽水溶液，另三組分別按1.5mg/kg，3.0 mg/kg ，6.0 mg/kg注射尼古丁溶液，均連續(xù)注射3周；無菌取小鼠脾臟，不銹鋼網(wǎng)制備脾細(xì)胞溶液，尼龍棉柱法分離T淋巴細(xì)胞；分別加入Thy-1-FITC抗體，CD4-FITC抗體和CD8-PE抗體，流式細(xì)胞儀檢測并分析T細(xì)胞的分離率及CD4+細(xì)胞與CD8+細(xì)胞的比值；（2）使用Mouse Th1/Th2 Cytokine CBA試劑盒檢測血漿樣品中5種細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ和TNF-α的濃度。（3）抽提T淋巴細(xì)胞總RNA，設(shè)計以上五種細(xì)胞因子的特異引物，RT-PCR法擴增特異片段，瓊脂糖凝膠電泳并照相，凝膠分析系統(tǒng)分析結(jié)果。結(jié)果:（1）T淋巴細(xì)胞的分離率在78.53％－83.66％之間，即應(yīng)用尼龍棉柱法分離T淋巴細(xì)胞可達(dá)到80％左右的分離率；對T淋巴細(xì)胞中CD4/CD8比例的測定結(jié)果顯示，3個濃度組和對照組相比均有顯著性差異，P0.05，說明尼古丁影響T淋巴細(xì)胞CD4+和CD8+亞群的分化，使CD4/CD8比例降低，而且，高濃度尼古丁的作用更加顯著。（2）經(jīng)不同濃度尼古丁處理后，血漿中五種細(xì)胞因子的含量發(fā)生明顯改變：IL-2和TNF-α濃度增加，，IL-4和IL-5濃度降低。IFN-γ沒有檢測到。（3）RT-PCR結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度尼古丁處理后，T細(xì)胞內(nèi)五種細(xì)胞因子的基因表達(dá)均受到不同程度的影響，IL-4、IL-5和TNF-α的基因表達(dá)下降，IL-2和IFN-γ基因表達(dá)增高。結(jié)論:小鼠經(jīng)尼古丁處理后，CD4+細(xì)胞與CD8+細(xì)胞的比值下降，Th2細(xì)胞因子（IL-4、IL-5）的表達(dá)下降，Th1細(xì)胞因子(IL-2、IFN-γ)表達(dá)有增高趨勢。因此，尼古丁可能影響T淋巴細(xì)胞CD4+和CD8+亞群的分化，使CD4/CD8比例降低；可能影響Th1,Th2細(xì)胞的平衡，主要是抑制Th2細(xì)胞，進(jìn)而抑制體液免疫應(yīng)答。
【圖文】：

結(jié) 果 T 淋巴細(xì)胞的分離率只 6-8 周的 BALB/C 雌性小鼠隨機分為 4 組：對照組、1、6.0 mg 組。實驗組每組每天分別按 1.5mg/kg，3.0 mg/kg，注射尼古丁溶液；對照組小鼠每天腹部皮下注射生理鹽 3 周；無菌取出小鼠脾臟,不銹鋼網(wǎng)制備單個脾臟細(xì)胞懸裂解紅細(xì)胞后，尼龍棉柱法分離 T 淋巴細(xì)胞。細(xì)胞計數(shù)胞數(shù)<1×106個/ml，加入 Thy-1 抗體，4℃避光孵育 30 分T 淋巴細(xì)胞表面的特異性分子，利用 Thy-1 抗體只與 T 淋的原理，流式細(xì)胞儀檢測 Thy-1 抗體發(fā)出的綠色熒光，用 數(shù)據(jù)獲取和分析，每份樣本獲取 10000 個細(xì)胞,即可計算個細(xì)胞溶液中細(xì)胞的比率，即 T 淋巴細(xì)胞分離率，見圖

即可計算出各門內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量，M2 門內(nèi)的細(xì)胞數(shù)與總細(xì)胞數(shù)的比值即為 T 淋巴細(xì)胞的分離率。每個樣本均獲取三次數(shù)據(jù)，分別統(tǒng)計后計算平均值。對所有樣本進(jìn)行同樣的分析，發(fā)現(xiàn) T 淋巴細(xì)胞的分離率在 78.53％－83.66％之間。因此，應(yīng)用尼龍棉柱法分離 T 淋巴細(xì)胞可以達(dá)到 80％左右的分離率。2. T 淋巴細(xì)胞中 CD4/CD8 比例尼龍棉柱法分離 T 淋巴細(xì)胞，細(xì)胞計數(shù)后進(jìn)行稀釋，使細(xì)胞數(shù)<1×10個/ml。在 T 淋巴細(xì)胞中加入 CD4-FITC 和 CD8-PE 抗體，4℃避光孵育 3分鐘，用流式細(xì)胞儀對 CD4+細(xì)胞數(shù)和 CD8+細(xì)胞數(shù)進(jìn)行檢測，用 Cell Que軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)獲取和分析，每份樣本獲取 10000 個細(xì)胞。圖 3－2 為細(xì)胞獲取和分析的散點圖。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 朱振杰;一組有關(guān)吸煙危害的數(shù)據(jù)資料[J];生物學(xué)教學(xué);2002年03期

本文編號：2670249