本文關(guān)鍵詞：羊膜上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞短期歸巢能力的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：我們?cè)谇捌诠ぷ髦幸炎C實(shí),羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(amniotic mesenchymal stem cells,AMSC)體外具有與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)相似的支持造血作用,甚至表達(dá)比BMSC更豐富的造血細(xì)胞因子。與羊膜上皮細(xì)胞(amniotic epithelial cells,AEC)共培養(yǎng)可以有效增加AMSC表面CXCR4的表達(dá),并保持良好的細(xì)胞活性。我們推測(cè)可能與AEC和AMSC共培養(yǎng)產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子的作用有關(guān)。但由于AMSC與AEC共培養(yǎng)成本高、操作較復(fù)雜、難以滿足臨床治療所需大量細(xì)胞,在臨床上應(yīng)用中受到限制。而條件培養(yǎng)基具有成本低,方法簡(jiǎn)便、可凍存?zhèn)溆玫葍?yōu)點(diǎn)。故本研究擬通過采用AEC條件培養(yǎng)基培養(yǎng)AMSC,觀察AMSC生物學(xué)特性的變化,并與前期的共培養(yǎng)作比較,探索條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的可行性；同時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)中細(xì)胞因子分泌的變化,探討細(xì)胞因子對(duì)CXCR4表達(dá)變化的影響；最后將AEC條件培養(yǎng)基培養(yǎng)后的AMSC輸入亞致死劑量照射后的NOD/SCID小鼠體內(nèi),觀察其短期歸巢能力的變化,探討SDF-1/CXCR4軸在AMSC的歸巢、遷移過程中的作用。擬為AMSC應(yīng)用于臨床奠定理論基礎(chǔ),也希望為臨床提高M(jìn)SC移植療效提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：分別采用組織塊法和消化法從羊膜中分離、培養(yǎng)AMSC和AEC,建立條件培養(yǎng)體系。實(shí)驗(yàn)分組為條件培養(yǎng)組、血清培養(yǎng)組(即常規(guī)培養(yǎng)組)、無血清培養(yǎng)組。應(yīng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法及MTT法觀察條件培養(yǎng)48h對(duì)AMSC細(xì)胞活力的影響；采用流式免疫分析檢測(cè)AMSC表面CXCR4及IL-6受體的表達(dá)；同時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)中多種細(xì)胞因子(IL-8、IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、IL-12P70)的含量；結(jié)合millicell小室探索條件培養(yǎng)基培養(yǎng)對(duì)AMSC體外遷移能力的影響；最后將條件培養(yǎng)組與血清培養(yǎng)組AMSC行PKH26染色后輸入NOD/SCID小鼠體內(nèi),24h后處死小鼠,取受體小鼠的骨髓,用流式細(xì)胞儀分析其中PKH26+供體細(xì)胞的數(shù)量。結(jié)果：1、培養(yǎng)48h后,條件培養(yǎng)組與血清培養(yǎng)組AMSC存活率均高于無血清組。2、條件培養(yǎng)組與血清培養(yǎng)組的增殖活性均高于無血清培養(yǎng)組。3、條件培養(yǎng)組與無血清培養(yǎng)組細(xì)胞表面的CXCR4及IL-6受體(CD126)的表達(dá)均高于血清培養(yǎng)組。4、用中和抗體封閉IL-6后,條件培養(yǎng)組AMSC表面CXCR4及IL-6受體表達(dá)均下降。5、與前期AEC共培養(yǎng)相比,AEC條件培養(yǎng)基培養(yǎng)對(duì)AMSC的生物學(xué)特性的影響并無明顯差異。6、通過流式免疫分析檢測(cè)培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子發(fā)現(xiàn),IL-8、IL-6、IL-1p的分泌量均高,尤以IL-8、IL-6顯著。7、AMSC體外能夠沿SDF-1濃度梯度趨化遷移,條件培養(yǎng)組的AMSC遷移數(shù)高于血清培養(yǎng)組。8、AMSC移植入受體小鼠后,條件培養(yǎng)組較血清培養(yǎng)組歸巢至小鼠骨髓的細(xì)胞數(shù)量增加,用CXCR4的中和抗體預(yù)先孵育后,AMSC歸巢數(shù)量明顯減少。結(jié)論：1、AEC條件培養(yǎng)基培養(yǎng)AMSC在保持其增殖活性的同時(shí),能有效上調(diào)細(xì)胞表面CXCR4及IL-6受體(CD126)的表達(dá)。2、在AEC條件培養(yǎng)基上調(diào)AMSC表面CXCR4的表達(dá)中,IL-6等細(xì)胞因子及其受體可能起了重要作用。3、AEC條件培養(yǎng)基培養(yǎng),在體外增強(qiáng)了AMSC沿SDF-1濃度梯度遷移的能力,并增強(qiáng)體內(nèi)短期歸巢至骨髓的細(xì)胞數(shù)量。4、在AMSC向骨髓歸巢過程中,SDF/CXCR4軸起重要作用。
【關(guān)鍵詞】：羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞 羊膜上皮細(xì)胞 條件培養(yǎng)基 CXCR4 細(xì)胞因子 歸巢
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 英文縮寫詞一覽表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一部分 AEC條件培養(yǎng)基培養(yǎng)AMSC對(duì)其生物學(xué)特性的影響10-37
• 實(shí)驗(yàn)材料11-12
• 實(shí)驗(yàn)方法12-18
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-34
• 討論34-37
• 第二部分 AEC條件培養(yǎng)基培養(yǎng)AMSC對(duì)其短期歸巢能力的影響37-51
• 實(shí)驗(yàn)材料39-40
• 實(shí)驗(yàn)方法40-43
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-49
• 討論49-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 文獻(xiàn)綜述55-62
• 綜述參考文獻(xiàn)59-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況62-63
• 致謝63-64

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：羊膜上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞短期歸巢能力的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：266690