【摘要】：以人的垂體為材料，在垂體表達(dá)譜中發(fā)現(xiàn)了一個內(nèi)分泌組織特異表達(dá)的新基因，用RT—PCR的方法從垂體cDNA庫里克隆到了該基因。通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)新基因即為E2F-Like基因，它定位于人體X染色體長臂的26.2位點(diǎn)上，其蛋白質(zhì)具有E2F_TDP結(jié)構(gòu)域，和E2F家族的DP1，DP2具有很高的同源性，故將其命名為DP3。成功地構(gòu)建了DP3—1蛋白的原核表達(dá)載體pGEX—4T—1／dp3—1，篩選到最佳誘導(dǎo)條件為0.2mM IPTG，30℃，4hr，誘導(dǎo)后分離純化得到了3mg DP3—1蛋白，用于免疫兔子以得到針對DP3—1蛋白的抗體，經(jīng)過驗(yàn)證所得抗體的特異性和效價均很高。同時成功構(gòu)建了dp3的真核表達(dá)載體pcDNA3.1／myc-His(-)A／dp3，并且證明了dp3基因在真核細(xì)胞中可以較好地得到表達(dá)，采用免疫熒光定位法發(fā)現(xiàn)DP3蛋白定位在細(xì)胞的胞漿中。構(gòu)建了中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)穩(wěn)定細(xì)胞株(CHO—AB4)，，在該穩(wěn)定細(xì)胞株基礎(chǔ)上采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定株的細(xì)胞S期明顯比對照高，DP3具有促進(jìn)細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)變的作用，說明DP3在細(xì)胞周期方面具有明顯的作用。
【圖文】：

我們選取了44個novelEST序列，對其引物設(shè)計(jì)后，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)，經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，對這些PCR產(chǎn)物和p一actin的灰度值進(jìn)行比較，獲得每個基因的相對表達(dá)量。通過GeneCluster和TreeView軟件分析，獲得基因表達(dá)圖譜圖1(紅色表示陰性，綠色表示陽性，灰色則介于兩者之間)。由圖1一1可見:大多數(shù)基因都在垂體組織中高表達(dá)，并在其它組織中(脾、肌肉、肺、心臟、皋丸、胸腺、‘腎、小腸、大腦)表達(dá)量相對較少或根本呈陰性，這提示我們:這些EST代表的基因有可能在垂體中比較特異。其中新基因(有*標(biāo)記)只表達(dá)在垂體、翠丸、胸腺等內(nèi)分泌組織中，在肺和小腸也有少許表達(dá)。圖1一1新基因表達(dá)譜1.2特異新基因在各類群體垂體中的表達(dá)譜f一F:女性胎兒垂體:一八ro:女性老年垂體:以:男性胎兒垂體:一認(rèn)成人垂體姍:.‘k，.r:男性老年垂體:1kbl奄‘dder圖1一2新基因在垂體中的表達(dá)譜

我們選取了44個novelEST序列，對其引物設(shè)計(jì)后，進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)，經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，對這些PCR產(chǎn)物和p一actin的灰度值進(jìn)行比較，獲得每個基因的相對表達(dá)量。通過GeneCluster和TreeView軟件分析，獲得基因表達(dá)圖譜圖1(紅色表示陰性，綠色表示陽性，灰色則介于兩者之間)。由圖1一1可見:大多數(shù)基因都在垂體組織中高表達(dá)，并在其它組織中(脾、肌肉、肺、心臟、皋丸、胸腺、‘腎、小腸、大腦)表達(dá)量相對較少或根本呈陰性，這提示我們:這些EST代表的基因有可能在垂體中比較特異。其中新基因(有*標(biāo)記)只表達(dá)在垂體、翠丸、胸腺等內(nèi)分泌組織中，在肺和小腸也有少許表達(dá)。圖1一1新基因表達(dá)譜1.2特異新基因在各類群體垂體中的表達(dá)譜f一F:女性胎兒垂體:一八ro:女性老年垂體:以:男性胎兒垂體:一認(rèn)成人垂體姍:.‘k，.r:男性老年垂體:1kbl奄‘dder圖1一2新基因在垂體中的表達(dá)譜
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：Q78

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本文編號：2662255