【摘要】：近年來隨著醫(yī)療保健事業(yè)的發(fā)展和核工業(yè)技術(shù)的廣泛應(yīng)用,人們接受射線的機(jī)會(huì)日益增多,醫(yī)源性照射和非醫(yī)源性照射對機(jī)體造成放射損傷的可能性也隨之增大。放射損傷輕者引起基因突變,細(xì)胞凋亡,組織變性壞死,器官功能低下,機(jī)體免疫功能低下等;重者則出現(xiàn)器官功能衰竭,出現(xiàn)急、慢性放射綜合征,故對放射損傷防治的研究受到了廣大學(xué)者的極大關(guān)注。近年來,探討如何調(diào)動(dòng)機(jī)體的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制,已成為進(jìn)行放射損傷防治研究的新思路。 預(yù)處理作為一種普遍存在、具有共同內(nèi)在機(jī)制的內(nèi)源性保護(hù)現(xiàn)象,可以誘導(dǎo)不同環(huán)境因子間的交叉保護(hù)作用。缺氧預(yù)處理的方法簡便易行,保護(hù)作用確切。為證實(shí)缺氧預(yù)處理對放射損傷交叉保護(hù)作用的存在并揭示其可能機(jī)制,尤其是與缺氧密切相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子-缺氧誘導(dǎo)因子-1和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2/Bax 在保護(hù)效應(yīng)中的作用以及對氧自由基的影響,進(jìn)而為放射損傷防護(hù)提供新線索,本課題以對射線敏感的大鼠空腸上皮來源的IEC-6細(xì)胞為觀察對象,以37℃、5%CO2-95%N2混合氣孵育2h復(fù)氧24h為預(yù)處理模型,采用35Gy60Coγ射線照射后細(xì)胞的凋亡率、存活率為主要指標(biāo),運(yùn)用Western Blot和RT-PCR技術(shù),對此進(jìn)行了探討。 研究發(fā)現(xiàn):1. 與單純35Gy60Coγ射線照射組相比,37℃、5%CO2-95%N2混合氣孵育2h復(fù)氧24h的IEC-6細(xì)胞接受照射后,細(xì)胞的凋亡率和微核率分別由20.16±0.96%、85.00±5.16‰降至13.65±1.17%、61.00±4.32‰(p0.01、p0.01),存活率則由52.36±3.51%提高到65.36±4.16%(p0.05),光鏡和電鏡下細(xì)胞的損傷也明顯減輕。2. 與正常組相比,缺氧預(yù)處理2h復(fù)氧24h,培養(yǎng)液的氧濃度和培養(yǎng)體系中自由基產(chǎn)量沒有明顯變化,排除了氧效應(yīng)和預(yù)處理后自由基的變化對輻射效應(yīng)的直接影響。缺氧預(yù)處理(HPC)后24h SOD活性明顯增強(qiáng)(p0.01 vs 對照組),明顯抑制了照射后MDA的生成(p0.01 vs HPC合并放射組)。3. 缺氧明顯上調(diào)HIF-lα蛋白表達(dá);使用PI-3K抑制劑LY294002抑制HIF-lα蛋白表達(dá)后,阻斷了HPC對IEC-6細(xì)胞放射損傷的保護(hù)作用;使用HIF-lα特異性拮抗劑也很大程度阻斷了預(yù)處理的保護(hù)作用。4. WP=8 HPC明顯增加了預(yù)處理后24h-48h Bcl-2mRNA和蛋白的表達(dá),與預(yù)處理第二窗口出現(xiàn)的時(shí)間相一致;LY294002和HIF-lα拮抗劑明顯降低了Bcl-2的表達(dá);而預(yù)處理對Bax的影響并不顯著。 所獲結(jié)論如下:1. HPC 2h對24h后IEC-6細(xì)胞的放射損傷有交叉保護(hù)作用,HPC明顯減少了35Gy γ射線照射引起的細(xì)胞凋亡,提高了細(xì)胞存活率。2. 此模型中,排除了氧效應(yīng)和預(yù)處理后自由基的變化對輻射效應(yīng)的直接影響;預(yù)處理誘導(dǎo)的SOD參與了HPC的延遲保護(hù)作用。3. HIF-1在HPC的延遲保護(hù)效應(yīng)中發(fā)揮了重要作用。4. HIF-1在預(yù)處理中的作用部分是通過間接上調(diào)Bcl-2表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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1 任l，

本文編號：2651938