【摘要】： 目的：小鼠妊娠的1-8天是受精后胚泡發(fā)育，進(jìn)入宮腔，成熟后與子宮內(nèi)膜相互識(shí)別，定位，粘附，植入子宮內(nèi)膜，，直至胎盤循環(huán)開始的一段時(shí)間。其中胚胎著床是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，圍繞著床子宮內(nèi)膜也發(fā)生一系列的變化與之相協(xié)調(diào)。哺乳動(dòng)物胚胎著床是一個(gè)復(fù)雜的過程，在這個(gè)過程中有多種因素參與，包括激素、細(xì)胞因子、粘附分子、細(xì)胞表面寡糖、細(xì)胞外基質(zhì)、基質(zhì)金屬蛋白酶等，并形成一網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，精細(xì)地進(jìn)行調(diào)節(jié)使整個(gè)過程協(xié)調(diào)有序地進(jìn)行。近年來的研究表明細(xì)胞表面的寡糖發(fā)揮了重要作用。在胚胎發(fā)育早期細(xì)胞表面Le~y和Le~x寡糖抗原的表達(dá)有階段特異性。含單巖藻糖的Le~x參與胚胎桑椹期卵裂球緊密聚集的形成，而雙巖藻糖化的Le~y與著床密切相關(guān)。用Le~y特異性抗體封閉胚泡或子宮內(nèi)膜表面Le~y寡糖可以明顯抑制著床過程。研究已表明，子宮內(nèi)膜只在特定的時(shí)期即在“著床窗口”期(侵入性胚泡與接受態(tài)子宮相互作用，有利于胚泡著床的短暫時(shí)間)才對(duì)胚胎有接受性。子宮接受態(tài)的建立是在激素控制下，多因素參與的結(jié)果。基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)作為水解多種細(xì)胞外基質(zhì)成分的蛋白水解酶，廣泛參與基質(zhì)細(xì)胞的增殖和分化，即內(nèi)膜的蛻膜化過程，并調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜接受態(tài)的建立�；|(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)是參與滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮內(nèi)膜的主要蛋白酶，在共培養(yǎng)體系中如用抗體中和MMP-9會(huì)抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)可促進(jìn)基質(zhì)某些蛋白的合成，并降低蛋白酶的活性，還可調(diào)控細(xì)胞表面分子整合素的合成，參與內(nèi)膜接受態(tài)的建立。本文通過對(duì)小鼠圍著床期Le~y、Le~x、MMP-2、MMP-9和TGFβ1分布的研究，探討它們?cè)谛∈笾仓械淖饔茫钊胝J(rèn)識(shí)著床機(jī)理，以期為臨床人工助孕技術(shù)成功率的提高和抗著床避孕提供新的思路。 方法：用免疫組化的方法研究妊娠1-8天小鼠子宮各種因子的表達(dá)，并把著床后的子宮標(biāo)本用藍(lán)色染料區(qū)分為著床部位和非著床部位加以研究。 結(jié)果：1．Le~y在早期妊娠的1-4天，腺上皮和腔上皮表達(dá)均逐漸增強(qiáng)，近著床 前即第4天最強(qiáng)，且在腔上皮的表達(dá)傾向集中于子宮腔表面。著床后:著床部位第 5天L已全部分布于子宮腔表面，但腺體表達(dá)明顯減少，第六天胚胎和母體接觸 部位只有微弱表達(dá);非著床部位腔上皮和腺上皮均呈弱陽性表達(dá)，到第八天幾乎 無表達(dá)。2.Lex在早期妊娠第1一4天腔上皮的表達(dá)逐漸減弱，到第4天幾乎無表 達(dá)，而腺上皮的表達(dá)逐漸增強(qiáng)在第3天達(dá)高峰。著床后:著床部位第5天胚胎和 母體的接觸部位無表達(dá)，只有胚胎接觸外的腔上皮有弱表達(dá);非著床部位:腺體 的表達(dá)逐漸減少，腔上皮5一8天表達(dá)無變化均為弱表達(dá)。3.著床前MMP一2在腔 上皮和腺上皮有表達(dá)，均于第3天最強(qiáng)，間質(zhì)表達(dá)逐漸增強(qiáng)，第3天達(dá)高峰。著床 后著床部位第5天腔上皮呈強(qiáng)染色，隨蛻膜化進(jìn)行基質(zhì)內(nèi)表達(dá)傾向分布于靠近肌 層未發(fā)生蛻膜化的基質(zhì)，而第8天全部基質(zhì)均有表達(dá)且靠近系膜側(cè)明顯，5一8天滋養(yǎng) 細(xì)胞表達(dá)變化不大;非著床部位腔上皮和腺上皮無變化均為弱陽性，基質(zhì)幾乎全 無表達(dá)。4.著床前MMP一9在腔上皮和腺上皮表達(dá)一致，近著床前即第4天最強(qiáng)， 基質(zhì)內(nèi)染色逐漸增強(qiáng)，第4天最強(qiáng)。著床后第5天腔上皮和腺上皮有弱表達(dá)，第 5和8天整個(gè)基質(zhì)均有表達(dá)，6和7天只在未發(fā)生蛻膜化的基質(zhì)表達(dá)，滋養(yǎng)細(xì)胞在 第8天有較強(qiáng)表達(dá);非著床部位腺上皮和腔上皮均有表達(dá)，且5一8天沒有變化， 間質(zhì)幾乎無表達(dá)。5.著床前TGF pl在腔上皮和腺上皮有表達(dá)，均第3天最強(qiáng)， 基質(zhì)內(nèi)染色逐漸增強(qiáng)，第4天最強(qiáng)。著床后著床部位第5天基質(zhì)呈強(qiáng)染色，6一8天 基質(zhì)染色主要分布在未發(fā)生蛻膜化的基質(zhì)即靠近肌層的基質(zhì)，此外5一8天胚胎上 均有表達(dá)，滋養(yǎng)巨細(xì)胞第8天中度表達(dá)。非著床部位腔上皮和腺上皮均無明顯表 達(dá)，基質(zhì)內(nèi)呈均一的中等強(qiáng)度的表達(dá)。 結(jié)論:1.細(xì)胞表面雙巖藻糖化寡糖Ley在著床前(第4天)腔上皮和腺上皮的 表達(dá)最強(qiáng)，第5天在著床部位集中分布于腔上皮表面，而單巖藻糖化寡糖Lex在 第3天腺上皮表達(dá)最強(qiáng)，第5天胚胎接觸部位未見表達(dá)而腔上皮其他部位有弱表 達(dá)，以上分布特點(diǎn)驗(yàn)證了Ley參與了母一胎的識(shí)別和粘附，而Lex與胚胎的識(shí)別和 粘附無關(guān)。2.基質(zhì)金屬蛋白酶類MMP一2在著床前腔上皮、腺上皮、間質(zhì)第3天 有最強(qiáng)表達(dá)，而N且邊P一9第4天表達(dá)最強(qiáng);著床后，兩者在第5和8天的整個(gè)間 質(zhì)均有表達(dá)，6一7天主要在臨近肌層的未發(fā)生蛻膜化的間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，另外 MMP一2在第5天腔上皮強(qiáng)表達(dá)，MMP一9在滋養(yǎng)細(xì)胞有較強(qiáng)表達(dá)。結(jié)果說明MMP一2 和MMP一9與內(nèi)膜接受態(tài)的建立及蛻膜化過程有關(guān)，并且與MMP一9主要參與滋養(yǎng) 細(xì)胞的侵入過程相符。3.TGF pl在著床前腔上皮、腺上皮、間質(zhì)均第3天表達(dá)達(dá) 高峰，著床后第5天基質(zhì)強(qiáng)表達(dá)，6和7天只在未發(fā)生蛻膜化的基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)， 另外第8天滋養(yǎng)巨細(xì)胞有表達(dá)。此結(jié)果表明TGF日l與內(nèi)膜接受態(tài)的建立有關(guān)， 可能也參與了母一胎的抗排斥免疫。
【圖文】：

圖2Le搶的免疫組化結(jié)果圖中所示為妊娠第1(A)、2(B)、3(C)、4(D)天及第5天著床部位(E)、非著床部位(F)和第6天著床部位(G)、非著床部位(H)‘的免疫染色。x100(箭頭所指為胚胎)

Le搶的免疫組化結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R321

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1 馬翔;丁衛(wèi);冒韻東;王Z

本文編號(hào)：2621373