發(fā)布時間：2020-04-07 18:23

【摘要】： 目的: 探討人蛔蟲感染期幼蟲提取物是否可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人肺上皮細(xì)胞凋亡，以及細(xì)胞凋亡與提取物濃度和作用時間的相互關(guān)系。 方法: 1. 對江西省新建縣昌邑鄉(xiāng)小學(xué)學(xué)生實施驅(qū)蟲治療，口服雙羥萘酸噻嘧啶（30mg／kg體重），服藥后24h，從排出的糞便中收集人蛔蟲成蟲。 2. 解剖人蛔蟲雌性成蟲子宮，收集蟲卵, 用0.5％次氯酸鈉去除蟲卵蛋白質(zhì)膜，再將洗滌數(shù)次后的蟲卵放在0.1N的 H2SO4中培養(yǎng)，30±1℃培養(yǎng)2-3周，鏡下觀察卵內(nèi)幼蟲確已蛻皮即發(fā)育為感染期蛔蟲卵。 3. 將感染期卵洗滌數(shù)次后移入含有小玻璃珠（直徑2mm）的錐形瓶內(nèi)，人工振蕩2-3分鐘，幼蟲全部破殼而出，然后將此懸液沿管壁輕輕移至裝有淋巴細(xì)胞分離液的試管中，懸液加至淋巴細(xì)胞分離液的表面，1200rpm 離心10分鐘，沉淀層即為幼蟲層。將獲得的幼蟲在冰上進(jìn)行勻漿，反復(fù)凍融三次，1000rpm離心10分鐘，上清即幼蟲提取物，將其貯存在-30℃?zhèn)溆谩?4. 根據(jù)細(xì)胞毒性試驗（MTT試驗）結(jié)果，選用10(g/ml、30(g/ml、100(g/ml、300(g/ml、600(g/ml五種不同濃度的幼蟲提取物，誘導(dǎo)人 WP=5 肺上皮細(xì)胞（A549）。 分別在誘導(dǎo)后的五個時間段采用HE染色盲法計數(shù)和二苯胺法測DNA斷裂率觀察肺上皮細(xì)胞凋亡情況。同時對某個時間和濃度組的樣本，加用透射電鏡、DNA瓊脂糖凝膠電泳和流式細(xì)胞儀的方法檢測細(xì)胞凋亡。 結(jié)果: 1. 培養(yǎng)的A549細(xì)胞爬片后進(jìn)行HE染色，光鏡觀察可見：經(jīng)過不同濃度幼蟲提取物誘導(dǎo)后的肺上皮細(xì)胞，其凋亡率明顯高于對照組的細(xì)胞凋亡率。對照組絕大多數(shù)肺上皮細(xì)胞都保持原有的生長形狀如多角形、梭形，細(xì)胞核體積大，完整，染成均一淺藍(lán)色，而經(jīng)不同濃度幼蟲提取物誘導(dǎo)后的肺上皮細(xì)胞呈現(xiàn)特征性的凋亡形態(tài)學(xué)改變，如細(xì)胞變小、變圓，細(xì)胞核固縮、碎裂，，染色質(zhì)被染成深藍(lán)色或藍(lán)黑色，細(xì)胞膜皺折、卷曲和出泡以及芽生成膜包裹的凋亡小體。在透射電鏡下觀察，對照組肺上皮細(xì)胞核體積大、完整，電子密度均勻。而凋亡的肺上皮細(xì)胞核染色質(zhì)發(fā)生邊集、核固縮、核碎裂，細(xì)胞體積變小、胞漿濃縮、胞漿內(nèi)空泡增多、胞膜出泡及凋亡小體。經(jīng)過300(g/ml濃度提取物誘導(dǎo)后的肺上皮細(xì)胞，其DNA瓊脂糖凝膠電泳呈現(xiàn)特征性“梯狀”條帶圖譜，而對照組肺上皮細(xì)胞的DNA瓊脂糖凝膠電泳呈現(xiàn)無規(guī)律性的彌散狀。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示：當(dāng)細(xì)胞群出現(xiàn)凋亡時，其二倍體峰值比正常細(xì)胞降低，而且出現(xiàn)一個亞二倍體峰。二苯胺法測細(xì)胞DNA斷裂率結(jié)果也顯示，五種不同濃度的幼蟲提取物誘導(dǎo)后的細(xì)胞DNA斷裂率明顯高于對照組肺上皮細(xì)胞DNA斷裂率。 2. HE染色和二苯胺法測DNA斷裂率的結(jié)果，清楚提示人蛔蟲感染 WP=6 期幼蟲提取物誘導(dǎo)人肺上皮細(xì)胞凋亡的兩種基本態(tài)勢，即從各個時間段看，細(xì)胞凋亡率隨幼蟲提取物濃度的增加而增加；從各個濃度組來看，誘導(dǎo)后的5小時之前，凋亡率隨著誘導(dǎo)時間的延長而增加，而此后則隨時間延長而降低。 結(jié)論: 1. 人蛔蟲感染期幼蟲提取物能夠誘導(dǎo)人肺上皮細(xì)胞的凋亡。 2. 人蛔蟲感染期幼蟲提取物體外誘導(dǎo)的人肺上皮細(xì)胞凋亡，呈明顯的濃度依賴關(guān)系，即誘導(dǎo)物濃度越高，凋亡率越高。凋亡發(fā)生過程，在時間上表現(xiàn)為雙向變化關(guān)系，即在凋亡發(fā)生后的一定時間內(nèi)，凋亡率隨時間增加而增加，此后凋亡率逐漸降低。這種雙向變化關(guān)系的程度同時受濃度關(guān)系的影響。
【學(xué)位授予單位】：江西醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R383

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