【摘要】：成骨蛋白-1(OP-1)，亦即骨形成蛋白-7(BMP-7)，是TGF-β家族的成員之一，屬于Dpp-Vg1亞家族，與BMP-5、-6、-8(OP-2)關系最為密切。OP-1的cDNA全長1878bp，ORF1296bp，編碼431個氨基酸的多肽，以前體蛋白的形式分泌。包括N端的信號肽、中間的前肽、C端的成熟肽三部分，翻譯后的前體需要進一步加工修飾，包括切掉信號肽和前肽。OP-1的成骨活性主要表現(xiàn)在其羧基端成熟肽部分，這與TGF-β家族成員具有很大的相似性，它們在成熟肽部分保持很高的同源性，尤其是在TGF-β結(jié)構(gòu)域，7個半胱氨酸的位置是絕對保守的。成熟的OP-1具有誘導骨形成的作用，能夠促進各種骨缺損的修復和牙周重建，OP-1也能促進修復性牙本質(zhì)、牙骨質(zhì)的形成，還對腦缺氧或缺血有神經(jīng)保護作用，此外，OP-1還在胚胎發(fā)育中起著重要的調(diào)節(jié)作用，因此。具有十分樂觀的臨床前景。由于天然OP-1的缺乏和提取困難，基因工程重組人OP-1(rhOP-1)已成為滿足其研究和臨床需要的唯一可靠來源，目前國外對rhOP-1的理論研究和臨床應用研究已相當深入，hOP-1的全長cDNA已在真核系統(tǒng)獲得表達，但昂貴的成本和極低的表達量遠不能滿足需要。盡管大腸桿菌表達系統(tǒng)缺乏蛋白質(zhì)的翻譯后加工能力，并可能潛在地影響表達蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、抗原性、生物學活性等，但大腸桿菌表達系統(tǒng)所具有的低成本、高產(chǎn)量等優(yōu)點則是其它體系無法比擬的，因此仍是目前最常用的外源基因表達系統(tǒng)，國外已見到用大腸桿菌表達OP-1突變體的個別報道。在我國，關于OP-1的研究尚未起步。為啟動和促進我國對hOP-1的研究，本研究對中國人OP-1成熟肽基因進行了克隆、序列分析、5’端修飾和原核表達，并觀察了rhOP-1對體外培養(yǎng)的牙髓細胞骨鈣素和堿性磷酸酶的影響。 采用一步酸酚法從中國健康人胎盤組織中提取總RNA，用RT—PCR技術(shù)直接從胎盤cDNA單鏈庫中擴增出中國人OP-1成熟肽基因
【圖文】：

圖2.2.2OP一l在CHO中表達的加工模式v()潛在糖基化位點;(。蹄基化核;(▲)完成的糖基化日本H血即叭等用桿狀病毒表達系統(tǒng)，對非洲爪蟾的B側(cè)P[一7、B惻P[一2、B惻P[一4進行了表達。他們構(gòu)建了表達XB]班P一2、XB側(cè)P[一4、XR隨P一7的重組桿狀病毒，分別感染昆蟲細胞，用鼠的成骨細胞系MC3”一E1對昆蟲細胞條件培養(yǎng)液進行檢測，發(fā)現(xiàn)感染XB側(cè)P[一2、XB側(cè)P[一4重組病毒

3實驗結(jié)果3.1中國人胎盤組織莊八A單鏈庫的構(gòu)建以中國健康婦女胎盤組織塊(圖3.1.1)中提取的總RNA(圖3.1.2)中的n識NA為模板，以以90(dt);2一l:為引物按方法2.7逆轉(zhuǎn)錄合成dONA第一鏈，，將此逆轉(zhuǎn)錄的成八A單鏈庫置一20℃保存。圖3.1.2的
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：1997
【分類號】：R346

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 馬真勝;骨形態(tài)發(fā)生蛋白分子生物學研究現(xiàn)狀[J];國外醫(yī)學(創(chuàng)傷與外科基本問題分冊);1995年01期

2 張郁,蔭俊,史俊南,肖明振,陳建元,吳軍正;人牙髓成纖維細胞等的體外培養(yǎng)、生長特性和鑒定[J];牙體牙髓牙周病學雜志;1991年02期

3 陳文,付士紅,徐展,梁國棟,史俊南,候云德;成骨蛋白-1成熟蛋白編碼區(qū)cDNA克隆與序列分析[J];牙體牙髓牙周病學雜志;1997年02期

本文編號：2612922