【摘要】： 晚期氧化蛋白產(chǎn)物(Advanced oxidation protein products,AOPP)是Witko-Sarsat等于1996年首先報道的由尿毒癥血液透析患者血漿中分離出的含有雙酪氨酸的蛋白交聯(lián)產(chǎn)物,系因患者體內過高的氧化應激水平導致各種蛋白質氧化損傷所形成的終末產(chǎn)物的總稱。AOPP隨著慢性腎功能衰竭(Chronic renal failure,CRF)及氧化應激的進展,在患者的循環(huán)和組織中潴留,是一類新的尿毒癥毒素。現(xiàn)已明確,AOPP是一種炎癥介質,單核/巨噬細胞是其選擇性作用的靶細胞。AOPP能夠激活單核細胞,刺激TNF-α、IL-6、IL-1等炎性因子的合成釋放,促發(fā)細胞的炎癥效應,參與CRF患者全身微炎癥狀態(tài)的發(fā)生發(fā)展,是CRF免疫功能紊亂、加速性動脈粥樣硬化、透析相關性淀粉樣變等長期并發(fā)癥的重要致病環(huán)節(jié)。然而,AOPP一旦形成即不可逆,并且是高分子量蛋白聚合物,血液透析的清除效果極其有限,使得目前在針對AOPP的治療上存在很大的局限性。因而由其作用途徑入手,尋找干預靶點,阻斷其毒性作用,并在此基礎上篩選合適的藥物或設計新的清除方式應是針對AOPP治療的發(fā)展方向。因此,對AOPP作用途徑和機理的研究顯得尤為迫切和重要。 迄今為止,我們對AOPP發(fā)生作用的途徑和機理尚不清楚�，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn),AOPP與另外一種同屬化學修飾蛋白的尿毒癥毒素-晚期糖基化終產(chǎn)物(Advanced glycation end products,AGE)在形成、結構以及生物學作用上極其相似,兩者關系非常密切。AGE是蛋白質非酶糖化氧化的終產(chǎn)物,也是一種炎癥介質,通過細胞表面的幾種AGE結合蛋白發(fā)揮作用,其中認識最清楚的是AGE受體(Receptor for advanced glycation end products,RAGE),主要分布于單核/巨噬細胞表面。因此我們推測:單核細胞表面可能也存在AOPP的結合蛋白,由此結合蛋白介導AOPP的生物學作用。 為了驗證這一推測,本課題首先在體外制備分離高純度、有活性的AOPP-人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA),隨后建立以AOPP-HSA為靶點的生物傳感器技術平臺,在此技術平臺上,通過配體垂釣的方式,由單核細胞膜中定向分離AOPP結合蛋白,初步探討AOPP的作用途徑和機理,為尋找可能的干預靶點,阻斷AOPP的毒性作用,探索臨床防治CRF并發(fā)癥的新途徑奠定基礎。
【圖文】：

第三軍醫(yī)大學博士學位論文峰分子量為 700kD，第二峰分子量為 67kD，參照 Witko-Sarsa這兩個峰分別對應高分子量－AOPP(High molecular weP)和低分子量－AOPP(Low molecular weight-AOPP，LMW-AO分子量蛋白。全部洗脫液經(jīng)分部收集、檢測 AOPP 濃度，出現(xiàn)了管)，恰好與第一峰重疊，其余各峰盡管均能夠檢測到一定濃度顯的峰形。因此收集第一峰與 AOPP 峰的重疊部分即為凝膠層SA，，可能是 HMW-AOPP(見圖 1-1-6)。分別測得其中 AOPP 的白含量為 2.24mg/ml。此步對粗純品的預分離將 AOPP 純化了度/此步分離組分的 AOPP 濃度)。

圖 1-1-6 AOPP-HSA 粗純品的凝膠層析Fig.1-1-6 Gel chromatographic fractionation of crude AOPP-HSA膠層析分離組分的陰離子交換－HPLC 分離結果現(xiàn)有的文獻資料中未檢索到有關 AOPP-HSA 等電點的信息，無類，嘗試的方法是使用陽離子交換柱 Mono－S 和陰離子交換柱下分別在流動相 pH 5.0 和 pH 8.0 條件下進行預實驗，比較分離情S 柱分離效果欠佳，主要表現(xiàn)為分離峰的數(shù)目過少，且峰形不 8.0 時 Mono－Q 柱分離效果良好，可以分離出四個峰，峰形尖將流動相 pH 值改為 7.4，分離效果無明顯變化，因此選擇 MoPLC，于 pH 7.4 的條件下進行分離。此時可見四個峰分離清晰時間適當(第一峰前面的峰為穿過峰)。其中第一峰面積占總面積 12.467min，并與唯一的 AOPP 峰重疊(第 12－16 管)，合并各AOPP-HSA，分子量為 700kD(見圖 1-1-8、表 1-1-4)。經(jīng)檢測，
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R341

【參考文獻】

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1 楊小兵,侯凡凡,武強,周華,劉鄭榮,楊燕,張訓;慢性腎臟病患者晚期氧化蛋白產(chǎn)物血癥及其與動脈粥樣硬化的關系[J];中華內科雜志;2005年05期

2 陳瑗,周玫,侯凡凡,梁敏;氧化應激與慢性腎功能衰竭透析患者動脈粥樣硬化的發(fā)生[J];中華腎臟病雜志;2002年05期

3 歐陽平,劉尚喜,貝偉劍,賴文巖,侯凡凡,徐安龍;柿葉黃酮對晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導的血管外膜成纖維細胞增殖的影響[J];中藥材;2004年03期

本文編號：2602604