【摘要】： 肺炎克雷伯菌是醫(yī)院感染最常見的革蘭陰性桿菌之一。且其在醫(yī)院感染中常以耐藥菌株為主，70年代，，主要流行慶大霉素耐藥菌株，自83年在德國首次報(bào)道SHV-2型超廣譜酶β-內(nèi)酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases，ESBLs)以來，ESBLs在肺炎克雷伯菌中流行日益嚴(yán)重，世界各地均有報(bào)道，且有不斷增加的趨勢。肺炎克雷伯菌的耐藥機(jī)制主要是產(chǎn)生各種β-內(nèi)酰胺酶，特別是ESBLs。這些酶的耐藥基因往往被編碼在分子量較大的質(zhì)粒上，且這種質(zhì)粒又可同時(shí)攜帶其它的耐藥基因，造成肺炎克雷伯菌多重耐藥，限制了抗菌藥物在臨床治療中的選擇。而且，這些質(zhì)�？稍谕N甚至不同種的細(xì)菌之間傳播，極易造成醫(yī)院感染的暴發(fā)流行，是臨床防治非常棘手的問題。 本研究收集了我院2000年5～8月重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)臨床分離的耐藥譜相似的多重耐藥肺炎克雷伯菌6株。采用濃度梯度法測定6株菌株對13種抗菌藥物的最低抑菌濃度；脈沖場凝電泳(PFGE)分析其同源性；接合試驗(yàn)分析耐藥基因傳播機(jī)制；采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增臨床分離菌株及其相應(yīng)接合子的耐藥基因，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增的耐藥基因包括SHV-1、TEM-1、CTX-M-1組、CTX-M-2組、CTX-M-8組、CTX-M-9組、OXA-2組、OXA-10組及質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶FOX-1組。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆測序，確定β-內(nèi)酰胺酶基因型。采用等電聚焦電泳(Isoelectric Focus， 浙江大學(xué)2003屆碩士學(xué)位論文 IEF）測定臨床分離的菌株及接合子p－內(nèi)酚胺酶等電點(diǎn)。并對新發(fā)現(xiàn)的CTX－M上2基 因進(jìn)行原核表達(dá)，對表達(dá)重組菌進(jìn)行ESBLS鑒定及表達(dá)蛋白的等電點(diǎn)測定。 結(jié)果顯示6株臨床分離的肺炎克雷伯菌對多種抗菌藥物耐藥，耐藥譜基本一致， 接合子耐藥譜與原始菌相似。原始菌對亞胺培南高度敏感，對派拉西林／三陛巴坦。 頭抱腑酮／舒巴坦和頭抱毗肪的最低抑菌濃度（MIC）值增高。對其余檢測的抗菌藥 物高度耐藥。但原始菌株加克拉維酸后，頭抱他睫MIC仍3256ug／ml。6株肺炎克 雷伯菌的PFGE條帶及位置一致。6株細(xì)菌的接合子均有等電點(diǎn)…IS）5．4，7．7，8刀， 8二和 8．4的條帶，pI7．7的條帶能被氯哇西林抑制，而其他條帶則能被克拉維酸抑制。 PCR擴(kuò)增接合子 TEM、SHV和 CTX－M－1基因呈陽性反應(yīng)，克隆測序分別為 TEM－1。 SHV和一新型 p內(nèi)酚胺酶 CTX－M－22。CTX－M－22基因的原核表達(dá)，重組菌為產(chǎn) ESBLs菌株，表達(dá)蛋白的等電點(diǎn)約為8．4。 以上研究表明，6株臨床分離的肺炎克雷伯菌對多種抗菌藥物耐藥，而且其接 合子也有相似耐藥譜；6株細(xì)菌的質(zhì)粒攜帶多個(gè)p－內(nèi)酚胺酶的耐藥基因，包括TEMl。 SHV、新發(fā)現(xiàn)的 CTX型超廣譜p－內(nèi)酚胺酶 CTX－M22及有待進(jìn)一步研究的質(zhì)粒 介導(dǎo)的inpC酶；我院ICU病房由多重耐藥肺炎克雷伯菌引起一次小的醫(yī)院感染流 行。
【圖文】：

圖16株肺炎克雷伯菌的PFGE結(jié)果

2O00b10O0b500b250b圖2TEMPCR產(chǎn)物電泳結(jié)果子量標(biāo)記;1一6分別為kP52、kp94、沖128、kpl38、kpl4:產(chǎn)TEM一26菌株的PCR產(chǎn)物;8:陰性對照菌;9:HZOM12345678gM
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R378

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 周偉琳,陳亞崗,俞云松,余素飛,馬亦林;超廣譜β-內(nèi)酰胺酶SHV-12編碼基因的克隆及序列分析[J];中華傳染病雜志;2001年05期

2 朱戌冬,徐英春,吳偉元,王輝,陳民鈞;一種新CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶及其臨床意義[J];中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

本文編號：2600494