【摘要】： 風(fēng)疹病毒E1融合蛋白原核表達(dá)克隆的構(gòu)建與表達(dá) 碩士研究生 盧 寧 研究生導(dǎo)師 王 斌 教授 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院九八級(jí)病原生物學(xué)專業(yè) 中文摘要 目的 構(gòu)建風(fēng)疹病毒E1膜蛋白的原核表達(dá)體系，研究制備用于風(fēng)疹病毒（RV）血清學(xué)診斷的基因工程抗原。 方法 將風(fēng)疹病毒標(biāo)準(zhǔn)株接種細(xì)胞BHK-21，提取病毒的RNA，通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增RV E1膜蛋白主要抗原決定簇區(qū)212-242位氨基酸的編碼基因（nt 8886-8976），將此片段重組于原核融合蛋白表達(dá)載體pGEX 4T-2上，并轉(zhuǎn)入宿主菌E. coli. DH5α中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）融合蛋白，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)親和層析純化。純化產(chǎn)物經(jīng)Western-blot檢測(cè)其抗原性。 結(jié)果 RV E1融合蛋白可在E. coli. DH5α中有效表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)親合層析純化后可獲得單一目的蛋白條帶。Western-blot檢測(cè)結(jié)果表明此蛋白可與11份RV IgM-陽(yáng)性血清中8份（72.7%）發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，，而與6份陰性血清均不反應(yīng)。 結(jié)論 在原核表達(dá)系統(tǒng)中有效表達(dá)了保留風(fēng)疹病毒抗原性的融合蛋白，為制備RV重組抗原提供了方法學(xué)基礎(chǔ)，并為進(jìn)一步研制開(kāi)發(fā)新型RV診斷試劑提供了有用的資料。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R373.11

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 李秀義;溫和;;風(fēng)疹病毒研究進(jìn)展(綜述)[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年06期

2 錢(qián)冬萌,盧寧,閆志勇,王斌;風(fēng)疹病毒E1膜抗原的原核表達(dá)與純化鑒定[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期

3 王志玉;韓世杰;;風(fēng)疹病毒的分子生物學(xué)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));1986年04期

4 岳盈盈;李鵬;李志會(huì);宋楠楠;趙元昊;紀(jì)璇;孟紅;;風(fēng)疹病毒包膜糖蛋白E1的原核表達(dá)及條件優(yōu)化[J];山東醫(yī)藥;2010年03期

5 卓菲;楊貴清;劉衛(wèi)民;吳菲菲;何梅英;;實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)風(fēng)疹病毒的應(yīng)用研究[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年03期

6 可美毓;高雪軍;朱莉萍;;風(fēng)疹病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2006年02期

7 李初梅,顧方舟,陳伯權(quán);分泌抗風(fēng)疹病毒McAb雜交瘤細(xì)胞株的建立及其初步應(yīng)用[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1987年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 溫紅玲;風(fēng)疹病毒包膜糖蛋白E1的真核表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[D];山東大學(xué);2006年

2 劉曉麗;風(fēng)疹病毒包膜糖蛋白細(xì)胞融合活性位點(diǎn)的定位及衣殼蛋白對(duì)融合活性的影響[D];山東大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 馬貞麗;風(fēng)疹病毒E1重組蛋白及其抗原肽在大腸桿菌中的表達(dá)[D];暨南大學(xué);2011年

2 王燕;風(fēng)疹病毒流行毒株的分離鑒定及其E1區(qū)基因的序列分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

3 孫大光;重組ss-RVE1突變體融合蛋白的表達(dá)、純化及免疫學(xué)性質(zhì)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2600107