【摘要】： 風疹病毒E1融合蛋白原核表達克隆的構建與表達 碩士研究生 盧 寧 研究生導師 王 斌 教授 青島大學醫(yī)學院九八級病原生物學專業(yè) 中文摘要 目的 構建風疹病毒E1膜蛋白的原核表達體系，研究制備用于風疹病毒（RV）血清學診斷的基因工程抗原。 方法 將風疹病毒標準株接種細胞BHK-21，提取病毒的RNA，通過RT-PCR擴增RV E1膜蛋白主要抗原決定簇區(qū)212-242位氨基酸的編碼基因（nt 8886-8976），將此片段重組于原核融合蛋白表達載體pGEX 4T-2上，并轉入宿主菌E. coli. DH5α中，經(jīng)IPTG誘導表達谷胱甘肽轉移酶（GST）融合蛋白，表達產(chǎn)物經(jīng)親和層析純化。純化產(chǎn)物經(jīng)Western-blot檢測其抗原性。 結果 RV E1融合蛋白可在E. coli. DH5α中有效表達，表達產(chǎn)物經(jīng)親合層析純化后可獲得單一目的蛋白條帶。Western-blot檢測結果表明此蛋白可與11份RV IgM-陽性血清中8份（72.7%）發(fā)生結合反應，，而與6份陰性血清均不反應。 結論 在原核表達系統(tǒng)中有效表達了保留風疹病毒抗原性的融合蛋白，為制備RV重組抗原提供了方法學基礎，并為進一步研制開發(fā)新型RV診斷試劑提供了有用的資料。
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2001
【分類號】：R373.11

【共引文獻】

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本文編號：2600107