【摘要】： 目前認(rèn)為肝干細(xì)胞是體內(nèi)存在的一種具有自我增殖能力和多向分化潛能的干 細(xì)胞，可以分化為肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞。但對(duì)肝干細(xì)胞的研究還是 以體內(nèi)實(shí)驗(yàn)為主，，沒(méi)有成熟的分離培養(yǎng)肝干細(xì)胞的方法，而建立肝干細(xì)胞體外分 離培養(yǎng)方法和細(xì)胞模型，對(duì)其深入研究至關(guān)重要，也將為肝臟發(fā)生及其相關(guān)醫(yī)學(xué) 問(wèn)題的探討提供一個(gè)理想的研究平臺(tái)。為此，我們從小鼠胚胎肝臟和成體肝臟兩 個(gè)方面同時(shí)入手，對(duì)建立肝干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)方法進(jìn)行了研究。首先為了確證 小鼠胎肝中肝干細(xì)胞的存在，對(duì)來(lái)自小鼠胎肝的細(xì)胞進(jìn)行了移植實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)受體 小鼠的脾臟有多個(gè)增生結(jié)節(jié)出現(xiàn)，而且形成的結(jié)節(jié)數(shù)與移植的細(xì)胞數(shù)之間存在正 相關(guān)關(guān)系。組織病理學(xué)和免疫組化分析表明，結(jié)節(jié)中的細(xì)胞呈現(xiàn)多種形態(tài)，并且 分別表達(dá)AFP、CD34、CK19等多種分子標(biāo)志，從而證實(shí)在小鼠胎肝中存在著具 有多分化潛能的肝干細(xì)胞。然后，利用體外培養(yǎng)和體內(nèi)擴(kuò)散盒培養(yǎng)技術(shù)對(duì)小鼠胎 肝細(xì)胞進(jìn)行了分離培養(yǎng)，得到了表達(dá)AFP、CD34及Albumin等特異性分子標(biāo) 志的細(xì)胞克隆，并能傳4-5代。另外，根據(jù)目前對(duì)于肝干細(xì)胞在成體肝臟中的定 位，利用門(mén)靜脈灌流消化法分離并建立了來(lái)源于成體小鼠肝臟的呈現(xiàn)上皮樣生長(zhǎng) 的細(xì)胞系。體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)表明，這一細(xì)胞不僅可在受體鼠內(nèi)增殖形成脾結(jié)節(jié)，而 且結(jié)節(jié)內(nèi)細(xì)胞可以表達(dá)肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞的特異性標(biāo)志，表明這一細(xì)胞系具 有肝原始細(xì)胞的特性。最近，來(lái)自嚙齒類(lèi)和人的移植實(shí)驗(yàn)均表明，骨髓細(xì)胞可以 分化產(chǎn)生卵圓細(xì)胞，并進(jìn)而生成肝細(xì)胞，從而引發(fā)了我們對(duì)于肝干細(xì)胞的可能來(lái) 源進(jìn)行探討。通過(guò)Mx-cre~+雄性骨髓細(xì)胞被移植入雌性受體鼠內(nèi)，PCR分析和免 疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，受體鼠的部分肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞均有Mx-Cre的陽(yáng)性 表達(dá)。另外，在受體鼠的其他多種組織，如腎臟、脾臟、皮膚等，也發(fā)現(xiàn)Mx-Cre culrure anJ ChCharacterizatjon of Mouse HepaticStem CeCek Absrracr 一 陽(yáng)性細(xì)胞的存在。 這些方法和相應(yīng)細(xì)胞系的建立以及相關(guān)的探討將為肝干細(xì)胞廣泛而深入的研 究奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號(hào)：2599875