【摘要】：利用造血干細(xì)胞泵出某些熒光染料，如Rho123或Hochest33342，的特性來對(duì)其進(jìn)行分離純化是目前常用的方法之一。Hochest33342拒染的細(xì)胞在流式細(xì)胞分析中表現(xiàn)為處于底側(cè)部的一群細(xì)胞，因此這群細(xì)胞又被稱為側(cè)群細(xì)胞(side-population)或sp細(xì)胞。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Hochest33342的泵出是由ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的ABCG2基因介導(dǎo)的。ABCG2基因只在早期造血細(xì)胞中表達(dá)，隨細(xì)胞的分化，其表達(dá)迅速下調(diào)。但是ABCG2基因在早期造血細(xì)胞中表達(dá)的意義目前還不清楚。 在實(shí)驗(yàn)中，我們將ABCG2基因?qū)隟562細(xì)胞，觀察了其對(duì)細(xì)胞行為的影響，以揭示ABCG2可能的生物學(xué)功能。首先，ABCG2轉(zhuǎn)染沒有引起細(xì)胞形態(tài)的改變，說明ABCG2不參與細(xì)胞骨架相關(guān)的調(diào)節(jié)。隨后我們又研究了ABCG2對(duì)細(xì)胞的三大基本特性—增殖、分化、凋亡—的影響。臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)的結(jié)果顯示ABCG轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞增殖速度略低于空載體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞：經(jīng)過72h的培養(yǎng)后，，pcDNA3.1空載體轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞數(shù)增加了近3倍，而pcDNA3.1／ABCG轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞數(shù)僅增加2.5倍。與此結(jié)果相對(duì)應(yīng)的是，細(xì)胞周期分析顯示，ABCG2轉(zhuǎn)染造成部分細(xì)胞被滯留在G0／G1期(GO／G1％：43％versus31％)。以上結(jié)果提示ABCG2可能通過調(diào)控細(xì)胞周期參與了造血干細(xì)胞靜息狀態(tài)的維持。 另外，我們還研究了K562細(xì)胞的分化特性。結(jié)果顯示，ABCG2的表達(dá)促進(jìn)了PMA誘導(dǎo)的K562向巨核系的分化。我們推測是因?yàn)锳BCG2引起了細(xì)胞周期的阻滯，所以促進(jìn)了K562細(xì)胞的分化。 碩士學(xué)位論文 中文摘要 為了研究ABcGZ泵出底物的作用機(jī)制。我們還構(gòu)建了與綠色熒光蛋白融合表達(dá)的 ABcGZ真核表達(dá)載體，然后轉(zhuǎn)染McF一7細(xì)胞，觀察了轉(zhuǎn)染細(xì)胞對(duì)熒光染料HocheS七3 3 3 42 的泵出作用。結(jié)果顯示，PEGFP一cl/ABcGZ轉(zhuǎn)染后，表達(dá)綠色熒光的細(xì)胞對(duì) HocheS七3 3 3 42染料有拒染的特性，而不表達(dá)綠色熒光的細(xì)胞無此功能。pEGFP一c1空 載體轉(zhuǎn)染的對(duì)照組雖然也有綠色熒光表達(dá)，但無泵出染料的功能。表達(dá)ABcGZ的細(xì)胞 有泵出底物的功能，為我們下一步探討其可能的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R329

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7 陳

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