本文關(guān)鍵詞：UVA對(duì)球型脂質(zhì)膜模型內(nèi)質(zhì)粒DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)的破壞，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在有關(guān)細(xì)胞膜的光學(xué)性質(zhì)研究中,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞膜表面微小凹陷處呈現(xiàn)高亮,普遍認(rèn)為是反射光在細(xì)胞膜的凹隱處匯聚導(dǎo)致。這說(shuō)明細(xì)胞膜凹面具有聚光作用。球型細(xì)胞膜具有更大的凹面,且光的匯聚發(fā)生在其內(nèi)部,如果匯聚的光能對(duì)球形膜內(nèi)物質(zhì)產(chǎn)生作用,對(duì)拓展細(xì)胞膜生物學(xué)功能的理解將具有重要意義。本文采用UVA直接輻照內(nèi)含質(zhì)粒DNA的巨大單室脂質(zhì)體(Giant Unilamellar Vesicles, GUVs,一種理想的細(xì)胞膜模型),以探索球形的GUV膜結(jié)構(gòu)能否通過(guò)反射匯聚UVA,增強(qiáng)其對(duì)GUV內(nèi)部質(zhì)粒DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)的破壞。目的1.探索質(zhì)粒DNA不同濃度和分子量對(duì)GUV形態(tài)、GUV包裹的影響,篩選出制備GUV形態(tài)好、包裹量高的最優(yōu)條件,構(gòu)建內(nèi)含DNA的球型脂質(zhì)膜模型。2.篩選UVA破壞質(zhì)粒DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)的輻照劑量,觀察GUV能否增強(qiáng)UVA對(duì)其內(nèi)部質(zhì)粒DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)的破壞。方法1.根據(jù)GUV的制備液中pGV102-NC質(zhì)粒DNA濃度分為：0.01μmol/L組、0.02 μmol/L組、0.04 μmol/L組、0.08 μmol/L組、0.12 μmol/L組、0.16 μmol/L組和對(duì)照組(只含去離子水)。根據(jù)GUV的制備液中質(zhì)粒DNA分子量大小分為：2868bp組、6380bp組、8889bp組、37428bp組和對(duì)照組(只含去離子水)。觀察每組GUV的形成情況、統(tǒng)計(jì)GUV直徑分布、包裹率等。2.UVA輻照質(zhì)粒DNA,根據(jù)輻照的劑量不同進(jìn)行分組：1.83 MJ/m2組、3.69 MJ/m2組、7.37 MJ/m2組、14.74 MJ/m2組、29.49MJ/m2組、假照組和酶切組,凝膠電泳檢測(cè)DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)的雙鏈斷裂情況。將GUV樣品分為輻照GUV內(nèi)的質(zhì)粒DNA組、輻照GUV外的質(zhì)粒DNA組、輻照質(zhì)粒DNA組、假照GUV內(nèi)的質(zhì)粒DNA組、假照GUV外的質(zhì)粒DNA組、假照質(zhì)粒DNA組和酶切組,用1.83 MJ/m2的UVA輻照,用凝膠電泳檢測(cè)每組DNA的雙鏈斷裂。結(jié)果1.較低濃度DNA (0.01～0.12μmol/L)對(duì)GUV的形成影響不大,但隨著濃度的增加,GUV的直徑分布逐漸向5～25μm集中,直至高濃(0.16μmol/L)度下GUV不能形成。當(dāng)DNA濃度為0.04μmol/L,制備出GUV包裹率較高、形態(tài)好、內(nèi)DNA含量高。DNA濃度從0.01 μmol/L到0.08 μmol/L時(shí),GUV包裹率隨著DNA的濃度升高而增加,0.16μmol/L時(shí)達(dá)到最高,隨后,DNA濃度從0.08 μmol/L增加到0.12 μmol/L時(shí),包裹率會(huì)隨著DNA的濃度升高而降低。DNA分子量對(duì)GUV的形成影響不大,但對(duì)GUV的包裹率有較大的影響。DNA分子量從2868bp到6380bp時(shí),GUV包裹率會(huì)隨著DNA分子量增加而增加,隨后,DNA分子量從6380增加到37428bp,包裹率則隨著DNA的分子量升高而降低,最后在DNA分子量為37428bp時(shí),包裹率為0。2.1.83～29.49 MJ/m2劑量的UVA輻照質(zhì)粒DNA能明顯觀察到雙鍵斷裂,且斷裂量隨輻照劑量升高而增加。與GUV外質(zhì)粒DNA相比,1.83 MJ/m2 UVA輻照GUV內(nèi)質(zhì)粒DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)的雙鏈斷裂略多。結(jié)論1.在一定濃度和分子量的質(zhì)粒DNA溶液中,可通過(guò)電形成法制備出一定量直徑5～35μm,內(nèi)含0.12±0.08μmol/L DNA、形態(tài)良好的GUV,可為球形脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)的生物學(xué)功能研究提供內(nèi)含DNA的脂質(zhì)膜模型。2.高劑量的UVA能導(dǎo)致質(zhì)粒DNA雙鏈斷裂,球形的GUV可增強(qiáng)UVA對(duì)其內(nèi)部質(zhì)粒DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)的破壞。
【關(guān)鍵詞】：巨大單室脂質(zhì)體 UVA DNA 雙鏈斷裂
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13
• 第一部分 構(gòu)建內(nèi)含質(zhì)粒DNA的球型脂質(zhì)膜模型13-25
• 1 材料和方法14-18
• 2 結(jié)果18-23
• 3 討論23-24
• 4 小結(jié)24-25
• 第二部分 UVA對(duì)球型脂質(zhì)膜模型內(nèi)質(zhì)粒DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)的破壞25-31
• 1 材料與方法25-28
• 2 結(jié)果28-29
• 3 討論29-30
• 4 小結(jié)30-31
• 全文總結(jié)31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 文獻(xiàn)綜述35-40
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 致謝40-41
• 攻讀碩士期間撰寫(xiě)和發(fā)表的學(xué)術(shù)論文41

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  本文關(guān)鍵詞：UVA對(duì)球型脂質(zhì)膜模型內(nèi)質(zhì)粒DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)的破壞，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：259391