【摘要】： 粘液放線菌(Actinomyces viscosus)是導(dǎo)致牙周病患者牙周組織破壞的主要致病菌。研究表明,粘液放線菌菌毛促進(jìn)了粘液放線菌與牙周組織的粘附,是引起牙周病病理變化的重要細(xì)胞結(jié)構(gòu)。但是粘液放線菌菌毛的免疫學(xué)作用卻未見報(bào)道。因此,探討粘液放線菌菌毛對(duì)于某些與免疫有關(guān)的細(xì)胞因子的影響,對(duì)于闡明粘液放線菌在牙周病發(fā)病機(jī)理中所起的作用具有重要的理論意義。 目的:提取粘液放線菌菌毛,并檢測(cè)這種促進(jìn)粘液放線菌和牙周組織的粘附的細(xì)胞結(jié)構(gòu)是否能引起成纖維細(xì)胞表達(dá)釋放IL-1β,IL-6,TNF-α。 方法:首先用漩渦混勻器攪拌粘液放線菌懸液,然后采用低溫高速離心分離,提取粘液放線菌菌毛。采用考馬斯亮藍(lán)法和蒽酮法測(cè)定菌毛中蛋白質(zhì)和糖的含量,并進(jìn)行氨基酸組成分析,結(jié)合電鏡觀察,以確定菌毛的純度。將提取的粘液放線菌菌毛與小鼠成纖維細(xì)胞共培養(yǎng),48h后收集細(xì)胞培養(yǎng)基,用Western-blotting的方法分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中IL-1β, IL-6,TNF-α的表達(dá)水平。 結(jié)果: 1.電鏡結(jié)果: (1)厭氧培養(yǎng)48h后,粘液放線菌菌株19246表面存在菌毛。 (2)漩渦混勻器攪拌,結(jié)合低溫高速離心處理后,粘液放線菌菌毛與菌體充分分離,得到菌毛粗提物。 2.菌毛的化學(xué)組成:粘液放線菌菌毛主要由大量的蛋白質(zhì)和少量的糖組成,粘液放線菌菌毛包含大量的谷氨酸,甘氨酸,精氨酸;非極性氨基酸百分含量最高。 3.Western blotting結(jié)果: (1)將SDS-PAGE凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,用山羊抗小鼠TNF-а單克隆抗體及堿性磷酸酶標(biāo)記兔抗山羊IgG多克隆抗體二抗進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,菌毛處理過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)基中可檢測(cè)到TNF-а,而未經(jīng)菌毛處理的細(xì)胞培養(yǎng)基中未見TNF-а。 (2)將SDS-PAGE凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,兔抗小鼠IL-1β單克隆抗體及堿性磷酸酶標(biāo)記山羊抗兔IgG多克隆抗體二抗進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,菌毛處理過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)基中可檢測(cè)到IL-1β,而未經(jīng)菌毛處理的細(xì)胞培養(yǎng)基中未 見IL-1β。 (3)將SDS-PAGE凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,用山羊抗小鼠IL-6多克隆抗體及堿性磷酸酶標(biāo)記兔抗山羊IgG多克隆抗體二抗進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,菌毛處理過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)基中可檢測(cè)到IL-6,而未經(jīng)菌毛處理的細(xì)胞培養(yǎng)基中未見IL-6。 結(jié)論: 1、建立漩渦混勻器結(jié)合低溫高速離心的新方法充分分離粘液放線菌菌體和菌毛,得到菌毛粗提物。 2、粘液放線菌菌毛可以誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β、TNF-а、IL-6。
【圖文】：

粘液放線菌及其細(xì)胞壁表面的菌毛2．粘液放線菌菌毛的電鏡觀察結(jié)果箭頭所示菌毛

粘液放線菌菌毛
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R378;R781.4

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 李欣欣;H.pylori對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)及表達(dá)TNF-α的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 謝暉;三種貴金屬烤瓷合金的體外細(xì)胞毒性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：2585497