【摘要】： 目的：研究不同的缺氧方法對培養(yǎng)細胞二價金屬轉(zhuǎn)運體(Divalent metal transporter 1，DMTl)表達的影響，初步探討低氧誘導因子1(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1)與DMTl兩種異構體(+IRE DMTl和-IRE DMTl)之間的關系。 方法：用CoCl_2誘導PC12細胞及HepG2細胞缺氧，，檢測DMTl的表達，確定對COCl_2缺氧敏感的細胞株。在此基礎上用Western Blot法檢測低氧(1％O_2)及呼吸鏈抑制劑疊氮鈉(NaN_3)和魚藤酮(Rotenone)對該細胞株HIF-1α及DMTl表達的影響，用免疫細胞化學法檢測低氧(1％O_2)對HIF-1α及DMTl在該細胞內(nèi)分布的影響。 結果： 1．用不同濃度的COCl_2(0.025mM、0.05mM、0.125mM、0.25mM、0.5mM、1mM)處理PC12細胞4小時后，其+IRE DMTl的表達量與未用COCl_2處理時相比，均無明顯改變。 2．HepG2細胞在經(jīng)過不同濃度的COCl_2處理4小時后，隨著COCl_2濃度的增加，HIF-1α及DMTl的兩種異構體的表達均逐漸增加。當COCl_2濃度為1mM時HIF-1α表達量最大，在COCl_2濃度為0.5mM時+IRE DMTl和-IRE DMTl的表達量達到最高值。 3．HepG2細胞HIF-1α在低氧(1％O_2)處理1小時開始即有表達，3小時至6小時其表達量達到高峰。+IRE DMTl在低氧處理1小時也有增加，6小時達到最高峰。-IRE DMTl在低氧3小時開始表達有明顯增加，6小時達到最高并持續(xù)至12小時處。 4．HepG2細胞HIF-1α在低氧6小時有明顯表達，復氧24小時后，HIF-1α被降解。復氧24小時后，+IRE DMTl的表達也明顯少于單純低氧6小時的表達量，而-IRE DMTl的表達量卻無明顯改變。 5．HepG2細胞用NaN_3處理1小時后，DMTl的兩種異構體在NaN_3濃度為10mM及20mM時，其表達量均比對照組明顯增加；用rotenone處理24小時后，+IRE DMTl在rotenone濃度為20μM時，其表達量與對照組相比有明顯的增加，-IRE DMTl在rotenone濃度為1μM及20μM時，其表達量與對照組相比均無明顯改變；NaN_3和rotenone都不能使HepG2細胞HIF-1α明顯表達。 6．在常氧環(huán)境中，DMTl兩種異構體在HepG2細胞胞漿及胞核中均勻分布，HIF-1α無明顯表達。低氧(1％O_2)可使+IREDMTl聚集于胞漿及核膜上，而原本位于胞漿中的-IRE DMTl更趨向于胞膜，胞核中的-IRE DMTl也有向核膜集中的趨勢，但不如+IRE DMTl明顯，HIF-1α則在細胞核中大量表達。 結論： 1．CoCl_2和低氧(1％O_2)可使HepG2細胞的HIF-1α蓄積和DMTl兩種異構體的表達增加，并且三者的變化趨勢基本一致，提示DMTl的表達可能受到HIF-1的調(diào)控，DMTl可能是HIF-1的下游基因。 2．NaN_3和rotenone雖不能使HepG2細胞HIF-1α產(chǎn)生蓄積，但卻能使DMTl的表達發(fā)生變化，提示DMTl表達的調(diào)控可能除HIF-1之外還有其它的調(diào)控途徑。 3．低氧(1％O_2)可使HepG2細胞+IRE DMTl和-IRE DMTl在細胞內(nèi)的分布發(fā)生不同的改變，提示低氧對DMTl兩種異構體在細胞內(nèi)分布的調(diào)節(jié)不同，這可能與兩種異構體的功能不完全一致有關。
【學位授予單位】：南通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R363


本文編號：2581797