【摘要】：目的：克隆人白血病抑制因子(LIF)基因，構(gòu)建真核表達載體并進行表達，檢測表達產(chǎn)物對HL-60白血病細胞的作用，同時觀察經(jīng)LIF基因修飾的ECV-304細胞對臍血造血干/祖細胞(HSC/HPC)體外培養(yǎng)的影響。 方法：采用RT-PCR技術(shù)克隆人LIF基因，構(gòu)建重組真核表達質(zhì)粒pcDNA3.0-LIF。經(jīng)PCR、限制性內(nèi)切酶雙酶切鑒定和DNA測序正確后用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別將pcDNA3.0-LIF真核表達質(zhì)粒導入COS-7細胞和ECV-304人臍靜脈內(nèi)皮細胞，并通過G418篩選獲得能穩(wěn)定表達LIF的ECV-304轉(zhuǎn)基因細胞。通過形態(tài)學觀察、MTT、FCM法研究COS-7細胞表達產(chǎn)物對HL-60細胞的影響；通過激光掃描共聚焦顯微鏡、FCM、免疫細胞化學分析研究ECV-304轉(zhuǎn)基因細胞穩(wěn)定表達的rhLIF與IL-24基因在誘導HL-60細胞凋亡方面的協(xié)同作用；并用LIF基因修飾的ECV-304細胞與臍血CD34+細胞共培養(yǎng)，檢測培養(yǎng)前后CD34+細胞及CD34+CD54+細胞數(shù)量的變化，觀察轉(zhuǎn)LIF基因的ECV-304細胞對臍血造血細胞的影響。 結(jié)果：成功獲得609bp的編碼人LIF蛋白的基因，序列測定結(jié)果與GenBank報道的LIF序列相比除有一個堿基發(fā)生同義突變外，，其余均一致；pcDNA3.0-LIF真核重組表達質(zhì)粒構(gòu)建正確，人LIF基因可在COS-7和ECV-304兩種細胞中進行有效表達；表達產(chǎn)物對HL-60白血病細胞具有較
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 唐佩弦;;干細胞基礎(chǔ)研究的新進展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床;2006年01期

2 謝小燕,謝超,李錦,白慈賢,裴雪濤;具有維持造血干/祖細胞能力的新型豆類凝集素的分離、純化及功能鑒定[J];生物化學與生物物理進展;2004年02期

3 陸玲玲,楊光,李梁,裴雪濤,周雅德,馮凱,白慈賢;Tpo、IL-11基因修飾的基質(zhì)細胞對CD_(34)~+CD_(38)~-早期造血祖細胞擴增的影響[J];中華血液學雜志;2003年11期

4 張敏,劉芳,游泳,何偉,鄒萍,陳智超,劉仲萍,劉陵波;錘頭狀核酶抑制CTLL-2細胞凋亡而增強其對Yac-1細胞殺傷活性的實驗研究[J];中華血液學雜志;2004年12期

5 陳雄艷,盛偉華,謝宇鋒,繆競誠,白艷艷,楊吉成;人IL-24基因的克隆及在COS-7細胞中的表達[J];中國免疫學雜志;2004年10期

本文編號：2581097