【摘要】：據(jù)WHO資料統(tǒng)計(jì),到2000年全球約有3.5億HBV攜帶者。其中,大約有5%-10%的成人和80%-90%的兒童成為慢性乙型肝炎(CHB)。慢性乙型肝炎的長(zhǎng)期病程結(jié)局是肝硬化、肝衰竭和肝細(xì)胞癌(HCC)。基因疫苗具備可高效持久誘導(dǎo)保護(hù)性免疫、安全、穩(wěn)定、價(jià)格低廉、易于接種等特點(diǎn),彌補(bǔ)了減毒活疫苗/滅活疫苗和亞單位疫苗存在的這樣或那樣的不足,但其誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的效率相對(duì)較低,尤其是對(duì)于大的動(dòng)物種系和人類,這削弱了它們的實(shí)際應(yīng)用。 提高基因疫苗的效果,在低劑量基因疫苗的情況下誘導(dǎo)強(qiáng)有力的免疫應(yīng)答,成為疫苗設(shè)計(jì)者的目標(biāo)。至今為止,要達(dá)到這樣的目標(biāo),一般有以下三個(gè)方案: 1、修飾載體以增強(qiáng)抗原的表達(dá); 2、增加疫苗DNA的轉(zhuǎn)運(yùn); 3、輔佐劑的使用; 我們的目標(biāo)主要定位在了基因的轉(zhuǎn)運(yùn)上。在本論文中,我們提出了用體內(nèi)電轉(zhuǎn)染的方法,增強(qiáng)HBV基因疫苗的效果。同時(shí)我們也考察了prime-boost策略用作增強(qiáng)免疫應(yīng)答的有效性和安全性。 我們選擇了HBV preS2 +S和S基因片段作為DNA疫苗的靶基因,應(yīng)用分子克隆技術(shù)構(gòu)建了能夠表達(dá)HBV中蛋白基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1MS;能夠表達(dá)HBV小蛋白的真核表達(dá)質(zhì)粒pVR1012/HBs以及重組MVA病毒載體疫苗。應(yīng)用pVAX1MS對(duì)Balb/C小鼠用體內(nèi)電轉(zhuǎn)染方法進(jìn)行免疫,觀察DNA疫苗劑量、免疫注射途徑、體內(nèi)電轉(zhuǎn)染所使用的電壓等因素對(duì)免疫效果的影響;應(yīng)用真核表達(dá)質(zhì)粒pVR1012/HBs對(duì)HBV轉(zhuǎn)基因鼠進(jìn)行初免(priming),然后用重組MVA病毒載體進(jìn)行增強(qiáng)免疫(boost),通過檢測(cè)鼠血清中表面抗原、表面抗體的濃度,HBV DNA滴度,轉(zhuǎn)氨酶的變化,肝臟病理切片來整體衡量疫苗的治療作用以及疫苗對(duì)肝臟帶來的損傷;通過細(xì)胞免疫CTL的檢測(cè)研究該免疫策略發(fā)揮作用的機(jī)制。
【圖文】：

的粘端互補(bǔ)維持基因組的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，，粘端的兩側(cè)各有一個(gè) llbp 的順向重復(fù)序列（DR，5’-TTCACCTCTGC-3’），分別稱為 DR1 和 DR2。圖1 乙肝病毒各型顆粒模式圖2 乙肝病毒基因組結(jié)構(gòu)

乙肝病毒基因組結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392

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