本文關(guān)鍵詞：喹啉酸所致HD兔模型腦部NOS活性的變化及L-NNA對NOS陽性神經(jīng)元的保護作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：亨廷頓舞蹈病(HD)是一種人類常染色體顯性遺傳病,致病患者有不自主舞蹈樣動作和進行性認(rèn)知障礙,最終導(dǎo)致癡呆甚至死亡,此病廣泛分布于世界各地,以歐美白種人受累為多。一氧化氮(NO)是一種信使分子,介導(dǎo)了多種生理功能,它在一氧化氮合酶(NOS)的催化下,由L-精氨酸氧化產(chǎn)生:O2+L-Arg????NOSNO+胍氨酸。本試驗選取3月齡健康哈白兔60只,體重(2 300±200)g,隨機分為正常對照組、模型組、L-NNA治療組和鹽酸硫必利治療組4組,每組15只。利用腦立體定位技術(shù)于右側(cè)紋狀體注射6μL喹啉酸,制作兔HD模型,然后用NOS抑制劑Nω-硝基-L-精氨酸(L-NNA)和鹽酸硫必利對造模成功的HD兔進行比較治療。運用行為學(xué)及免疫組織化學(xué)方法對HD模型進行檢測。行為學(xué)測試結(jié)果顯示,本試驗制備的亨廷頓舞蹈病模型在術(shù)后24小時內(nèi)出現(xiàn)右側(cè)旋轉(zhuǎn)、翻滾等急性興奮性毒性行為;HE切片中可看到神經(jīng)元缺失和膠質(zhì)細胞增生,免疫組化檢測結(jié)果顯示對照組的額葉、紋狀體中有豐富的形狀為圓形或橢圓形的鈣結(jié)合蛋白(calbindin)免疫陽性神經(jīng)元,中等大小,胞體輪廓清晰,染色較深,免疫陽性反應(yīng)主要集中在核周的胞漿;而模型組的額葉和紋狀體中calbindin免疫陽性神經(jīng)元數(shù)量與對照組相比數(shù)量明顯減少,胞體輪廓變模糊。通過硝酸還原酶法和生化方法檢測各組家兔的血清和腦組織中的NO含量、NOS活性,免疫組化方法觀察各個腦組織中的NOS陽性神經(jīng)元的表達,探討NO與HD發(fā)病機理的關(guān)系和NOS抑制劑L-NNA對NO含量、NOS活性及NOS陽性神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。NOS活性檢測結(jié)果顯示:各組腦勻漿中總的一氧化氮合酶(TNOS)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)以模型中的含量最高,到35 d時基本恢復(fù)到正常水平;在紋狀體中,前期L-NNA治療組降低NOS活性的程度比鹽酸硫必利治療組的要好(P0.01)。NO含量檢測結(jié)果顯示:NO含量變化以模型組含量最高,各組兔額葉、海馬和紋狀體中的NO活性強弱基本與勻漿中的NOS含量變化相一致。通過SABC免疫組織化學(xué)染色方法,在顯微鏡下對各組家兔的額葉、海馬和紋狀體中的神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)陽性神經(jīng)元和iNOS陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)及分布進行觀察。結(jié)果顯示:模型組中的nNOS陽性神經(jīng)元密度較正常對照顯著減少,胞體截面積減小,陽性神經(jīng)元輪廓不清,突起數(shù)減少;而iNOS陽性神經(jīng)元密度比正常對照顯著增加,胞質(zhì)染色加深,輪廓清晰,第一級突起數(shù)和胞體截面積都顯著增加。L-NNA組的iNOS陽性神經(jīng)元的各項指標(biāo)比硫必利組的低。結(jié)果表明,HD模型組通過定點注射喹啉酸導(dǎo)致紋狀體發(fā)生急性神經(jīng)毒性變性,使得紋狀體中的部分神經(jīng)元缺失死亡伴隨著iNOS陽性神經(jīng)元表達增強,NO含量增加,高濃度的NO發(fā)揮神經(jīng)毒性作用,提示NO參與了HD模型的發(fā)病過程,加劇了腦組織的損傷程度。NOS抑制劑L-NNA通過抑制NOS的活性,降低了腦組織中的NO含量,對HD腦神經(jīng)元起到保護作用。鑒于兔模型與HD病人腦組織病變的相似性,推測L-NNA和鹽酸硫必利均可用于亨廷頓舞蹈病的治療,但是用藥的時間、劑量、配伍禁忌和療程等還有待進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：兔 亨廷頓舞蹈病 喹啉酸 一氧化氮 一氧化氮合酶 Nω-硝基-L-精氨酸(L-NNA)
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R742.2;R-332
【目錄】：

• 中文摘要9-11
• Abstract11-13
• 1 前言13-23
• 1.1 一氧化氮概述13-15
• 1.1.1 一氧化氮的生理作用機制14-15
• 1.1.2 一氧化氮病理作用機制15
• 1.2 一氧化氮合酶15-17
• 1.2.1 一氧化氮合酶的分布16-17
• 1.3 NO和NOS抑制劑17
• 1.4 亨廷頓病發(fā)病機制研究進展17-20
• 1.4.1 突變型亨廷頓蛋白的產(chǎn)生18
• 1.4.2 軸突傳輸改變和突觸失衡18-19
• 1.4.3 Htt對腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子轉(zhuǎn)錄的影響19
• 1.4.4 亨廷頓蛋白激活細胞凋亡機制19-20
• 1.4.5 線粒體功能障礙導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡20
• 1.5 亨廷頓病的治療現(xiàn)狀20-23
• 1.5.1 針對舞蹈樣動作的治療21
• 1.5.2 針對不同發(fā)病機制的治療21-22
• 1.5.3 通過神經(jīng)干細胞移植治療22
• 1.5.4 通過抑制劑的治療22-23
• 1.5.5 生長因子和其他方法23
• 1.6 本課題研究的目的和意義23
• 2 材料與方法23-30
• 2.1 試驗材料23-25
• 2.1.1 試驗動物23
• 2.1.2 主要試驗儀器23-24
• 2.1.3 主要試劑24-25
• 2.1.3.1 試驗儀器的準(zhǔn)備24-25
• 2.1.4 主要試劑的配制25
• 2.1.5 試驗場地及預(yù)試25
• 2.2 試驗分組及方法25-30
• 2.2.1 HD模型的制作25-26
• 2.2.2 分組及給藥方法26
• 2.2.3 行為學(xué)測試26
• 2.2.4 取材26-27
• 2.2.5 NO含量的測定27
• 2.2.6 NOS活性的測定27-28
• 2.2.7 石蠟切片的制作28-29
• 2.2.8 HE染色29
• 2.2.9 SABC免疫組化染色29
• 2.2.10 鏡檢和圖像分析29-30
• 2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析30
• 3 結(jié)果與分析30-46
• 3.1 行為學(xué)測試結(jié)果30
• 3.2 calbindin 免疫組織化學(xué)染色和 HE 染色結(jié)果30-31
• 3.3 各組家兔血清中NO含量檢測結(jié)果31-32
• 3.4 額葉、海馬和紋狀體中NO含量檢測結(jié)果32-34
• 3.5 額葉、海馬和紋狀體中NOS活性檢測結(jié)果34-38
• 3.5.1 TNOS活性的檢測結(jié)果34-36
• 3.5.2 iNOS活性的檢測結(jié)果36-38
• 3.6 兔腦額葉、海馬和紋狀體中nNOS陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布38-42
• 3.6.1 額葉中nNOS陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布38-39
• 3.6.2 海馬CA1區(qū)nNOS陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布39-41
• 3.6.3 紋狀體中nNOS陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布41-42
• 3.7 兔腦額葉、海馬和紋狀體中iNOS陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布42-46
• 3.7.1 額葉中iNOS陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布42-43
• 3.7.2 海馬iNOS陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布43-45
• 3.7.3 紋狀體中iNOS陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布45-46
• 4 討論46-49
• 4.1 用兔作為實驗動物制備HD模型的優(yōu)點46-47
• 4.2 注射喹啉酸導(dǎo)致的HD模型致病機制47
• 4.3 各組兔腦組織中NOS活性和血清中NO含量的變化47-48
• 4.4 各組兔腦組織中的nNOS和iNOS陽性神經(jīng)元的數(shù)量及形態(tài)變化48-49
• 4.5 NO對HD模型的損害機制和L-NNA對腦組織中NOS活性的影響49
• 5 結(jié)論49-51
• 6 參考文獻51-59
• 7 附錄59-65
• 8 致謝65

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉韶華;吳顥昕;姜亞軍;周紅;;大鼠腦出血早期腦組織神經(jīng)元型一氧化氮合酶mRNA表達及中藥抵當(dāng)湯干預(yù)對其的影響[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;2005年06期

  本文關(guān)鍵詞：喹啉酸所致HD兔模型腦部NOS活性的變化及L-NNA對NOS陽性神經(jīng)元的保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：257355