【摘要】： RNA編輯(RNA editing)是DNA轉(zhuǎn)錄成RNA后, RNA編輯酶(RNA editing enzyme)對(duì)前體mRNA中的核苷酸進(jìn)行刪除、添加或重新修飾的過(guò)程。它改變了基因的序列以及遺傳信息,從而產(chǎn)生廣泛的生理效應(yīng)。RNA編輯酶以脫氨方式使得RNA特異位點(diǎn)的腺嘌呤脫氨轉(zhuǎn)變?yōu)榇吸S嘌呤,或者是特異位點(diǎn)的胞嘧啶變?yōu)槟蜞奏?而次黃嘌呤在堿基配對(duì)時(shí)被識(shí)別為鳥(niǎo)嘌呤。這些替換使得原有遺傳密碼或者剪切位點(diǎn)發(fā)生轉(zhuǎn)變,從而使其編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變。ADAR1 (RNA依賴(lài)性腺嘌呤脫氨酶,adenosine deaminase acting on RNA)是研究最為廣泛的一種RNA編輯酶。研究顯示淋巴細(xì)胞增殖時(shí)ADAR1表達(dá)顯著升高,而降低ADAR1表達(dá)后淋巴細(xì)胞殺傷功能顯著降低。提示ADAR1可能通過(guò)調(diào)控細(xì)胞功能進(jìn)而影響排斥反應(yīng)的發(fā)生。本研究旨在探索細(xì)胞水平排斥反應(yīng)即經(jīng)典的雙向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中,降低ADAR1表達(dá)對(duì)淋巴細(xì)胞增殖能力以及其他基因表達(dá)的影響。因此,本研究分為兩部分,探索ADAR1對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力的影響以及對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響。 試驗(yàn)第一部分: 目的:探索ADAR1對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖功能的影響。 方法: ADAR1特異性siRNA轉(zhuǎn)入小鼠原代淋巴細(xì)胞,觀(guān)察細(xì)胞增殖的變化;通過(guò)RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中ADAR1 mRNA的變化;細(xì)胞計(jì)數(shù)、臺(tái)盼蘭拒染法和四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)降低ADAR1表達(dá)后對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果:抑制ADAR1表達(dá)24h后實(shí)驗(yàn)組存活淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著減少(P㩳0.01),而死亡細(xì)胞數(shù)量顯著增多(P㩳0.01),且MTT結(jié)果與之相符(P㩳0.01)。ADAR1 mRNA表達(dá)受到明顯抑制;對(duì)照組ADAR1表達(dá)沒(méi)有明顯變化,淋巴細(xì)胞受到抗原刺激而活化、增殖能力沒(méi)有明顯變化。說(shuō)明ADAR1的表達(dá)與淋巴細(xì)胞接受抗原刺激后活化及增殖能力密切相關(guān)。 結(jié)論:降低淋巴細(xì)胞ADAR1表達(dá)后,淋巴細(xì)胞受到抗原刺激而活化、增殖能力減弱,提示淋巴細(xì)胞增殖功能可能受到了抑制,而ADAR1可能發(fā)揮了重要作用。 試驗(yàn)第二部分: 目的:探索抑制ADAR1表達(dá)后小鼠淋巴細(xì)胞基因表達(dá)譜變化情況。 方法: ADAR1特異性siRNA轉(zhuǎn)入小鼠原代淋巴細(xì)胞。采用DNA微陣列技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染24h時(shí)小鼠淋巴細(xì)胞表達(dá)譜變化。 結(jié)果:抑制淋巴細(xì)胞內(nèi)ADAR1表達(dá)后,在mRNA水平上,393個(gè)基因表達(dá)發(fā)生了變化,表達(dá)上調(diào)超過(guò)兩倍的基因數(shù)目為78個(gè),下調(diào)超過(guò)2倍的基因數(shù)目為315個(gè)。表達(dá)下調(diào)基因包括細(xì)胞周期調(diào)控基因(例如CDC20、CDC14b等)以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因(例如IRF1、JAK1以及一系列嗅覺(jué)感受器受體基因等),說(shuō)明ADAR1的表達(dá)與淋巴細(xì)胞功能相關(guān)基因的表達(dá)關(guān)系密切。 結(jié)論:降低ADAR1表達(dá)后可引起小鼠淋巴細(xì)胞一系列基因表達(dá)的變化,其中包括一系列與細(xì)胞功能密切相關(guān)的基因,提示ADAR1可能通過(guò)調(diào)控其他基因進(jìn)而影響淋巴細(xì)胞的各項(xiàng)功能,為進(jìn)一步研究ADAR1作用機(jī)制做鋪墊。
【圖文】：

圖 1 3 組細(xì)胞數(shù)量變化情況圖 1 為 3 組細(xì)胞 24h 時(shí)數(shù)量變化的情況。A: 對(duì)照組 1 細(xì)胞 24h 后的數(shù)量情況(10×);B: 組 2 細(xì)胞 24h 后的數(shù)量情況(10×);C: 實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞 24h 后的數(shù)量情況(10×)。從圖中可出三組細(xì)胞的數(shù)目明顯不同且與 2 個(gè)對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)目 24h 后的數(shù)量明顯減

3 組細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果（n=4， x±s）
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R346

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