【摘要】： 肺表面活性物質(zhì)(Pulmonary Surfactant，PS)是一種主要由磷脂和特異性蛋白質(zhì)組成的脂蛋白復(fù)合物。PS的缺乏可引起呼吸窘迫綜合癥，特別在早產(chǎn)兒，發(fā)病率和死亡率都很高。自1980年P(guān)S首次被臨床應(yīng)用后，許多國(guó)家競(jìng)相研制PS新藥。迄今已研制出10多種藥物。根據(jù)來(lái)源不同，將PS藥物分為4類(lèi)：1．天然型PS(Natural Pulmonary Surfactant)從動(dòng)物肺或人羊水中提取。主要從豬肺和小牛肺灌洗液或肺勻漿中制備。2．改進(jìn)的天然型PS(Modified Natural PulmonarySurfactant)：在天然型PS中補(bǔ)充適當(dāng)比例的某些PS主要成分，如二棕櫚酰卵磷脂(Dipalmitoyllecithin，DPPC)和磷脂酰甘油(Phosphatidyl glycerol，PG)。使天然型藥物更加有效。3．人工型PS(Artificial or Synthetic Pulmonary Surfactant)：由幾種人工合成的PS主要磷脂成分或其它代用品按一定比例配制而成其主要特點(diǎn)是不含PS蛋白質(zhì)。4．合成的“天然”型PS(Synthetic″Natural″Pulmonary Surfactant)：由人工合成的PS主要磷脂成分加一定比例的用基因工程生產(chǎn)的PS蛋自質(zhì)配制而成。我國(guó)市場(chǎng)上僅有兩種肺表面活性物質(zhì)制劑被批準(zhǔn)上市銷(xiāo)售，一是意大利凱西制藥公司生產(chǎn)的固爾蘇(Curosurf)，劑型為混懸劑，價(jià)格昂貴，每支售價(jià)為4500元。另外一種是首都兒科研究所與雙鶴藥業(yè)公司合作開(kāi)發(fā)的注射用牛肺表面活性劑，劑型為凍干粉，于2005年11月取得國(guó)家藥檢局的新藥證書(shū)，每支售價(jià)為3750元。本文研究的人源性肺表面活性物質(zhì)(Hominine PulmonarySurfactant，HPS)從矽肺病人雙肺大容量灌洗液中提取，是一種全新的PS產(chǎn)品。目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。 我們?cè)诒贝骱用旱V工人療養(yǎng)院，對(duì)廢棄的肺灌洗液鑒定了PS和人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(Hominine Pulmonary Surfatcant-associated Protein A，SP-A)水平。確定有利用價(jià)值后，優(yōu)選了提取和純化的條件，并利用這些條件提純了PS和SP-A，進(jìn)行了體外活性實(shí)驗(yàn)和化學(xué)成份分析。對(duì)比前人，我們的PS和SP-A來(lái)自于人體肺灌洗液，有人源性的優(yōu)勢(shì)。同時(shí)在技術(shù)上利用透析方法簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)勞動(dòng)，利用層析純化的方式純化PS和SP-A，都是目前為止沒(méi)有報(bào)道過(guò)的創(chuàng)新之處，希望對(duì)未來(lái)患病的新生兒帶來(lái)福祉。最后對(duì)矽肺病人肺內(nèi)PS水平進(jìn)行了測(cè)定，對(duì)大容量灌洗后肺內(nèi)PS水平不同時(shí)間段恢復(fù)情況進(jìn)行了測(cè)定，希望可以造福于值得我們尊敬和熱愛(ài)的煤礦工人們。 第一部分矽肺病人雙肺大容量灌洗液的鑒定 目的 了解矽肺病人大容量肺灌洗液中提取PS是否可行。 方法 矽肺病人大容量全肺灌洗：手術(shù)室誘導(dǎo)麻醉，支氣管雙腔導(dǎo)管插管；純氧通氣，分隔兩肺，支氣管套囊注氣3ml；單肺通氣，送檢血?dú)夥治�，監(jiān)測(cè)血壓、心電圖、PaO2；左肺灌洗，0.9％氯化鈉灌洗液500ml／次，連續(xù)8-16次。采用Carlens管；觀察情況，一般情況好的(血壓、心電圖、PaO_2穩(wěn)定)行右肺灌沈。方法同前。不穩(wěn)定的擇期再灌洗右肺。(2-3天后) 鑒定肺灌洗液：顯微鏡檢12例灌洗液細(xì)胞成分比例，Ⅰ期和Ⅱ期病人各6例。灌洗液在4℃、1500×g離心15min，上清液在4℃、13000×g離心60min，收集所得的乳白色沉淀，即為HPS粗品，共收集12人次，Ⅰ期和Ⅱ期病人各6例。 ELISA方法鑒定PS含量：兩組矽肺病人分Ⅰ、Ⅱ期各6人次�？兹妇G直接顯色法檢測(cè)無(wú)機(jī)磷含量，間接推測(cè)磷脂含量。SP-A單抗B6B4E9H4D做40ug／ml稀釋?zhuān)话鍡l，4℃過(guò)夜，10％小牛血清封閉過(guò)夜，加入上述提取的樣品SP-A，加入酶標(biāo)抗體，37℃孵育1h，PBS洗板條，顯色，判定結(jié)果。 結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)Ⅰ期和Ⅱ期病人可提取粗品磷脂分別是每人次222.92±26.04mg和121.31±29.62mg，Ⅰ期多于Ⅱ期病人。兩組SP-A分別是每人次提取87.21±17.23mg和56.97±13.44 mg，也是Ⅰ期多于Ⅱ期病人。兩組比較P分別為0.000和0.007，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 顯微鏡檢Ⅰ期和Ⅱ期病人肺灌洗液中細(xì)胞成分和比例，Ⅰ期病人肺灌洗液中嗜中性粒細(xì)胞占有核細(xì)胞總數(shù)的64.04±10.35％，顯著多于Ⅱ期病人。Ⅱ期病人有核細(xì)胞中巨噬細(xì)胞占59.76±12.78％，顯著多于Ⅰ期病人。兩組比較P分別為0.001和0.000，巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞占有核細(xì)胞總數(shù)的比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 在早期矽肺病人大容量肺灌洗液中提取PS是可行的。在Ⅰ期病人肺內(nèi)嗜中性粒細(xì)胞較多，Ⅱ期巨噬細(xì)胞較多。相信在各自的期別具有各自介導(dǎo)炎性反應(yīng)的途徑。 第二部分正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選大容量矽肺病人灌洗液粗提PS的條件 目的 篩選從矽肺病人雙肺大容量灌洗(Whole-Lung Lavage，WLL)回收液體中粗提人源性肺泡表面活性物質(zhì)(Hominine Pulmonary Surfactant，HPS)的方法。 方法 以HPS的獲得量為指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。一個(gè)人的雙肺灌洗回收液均分9份。篩選不同初離心條件、不同孔徑透析袋濃縮、不同高速離心條件和不同化學(xué)試劑萃取，共9次實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果 以初離心：3000g，15min；3KD孔徑透析袋濃縮；高速離心條件10000g，15min；化學(xué)試劑正丁醇萃取為最佳條件。利用該條件從6人單肺灌洗液(共72000ml)中提取了PS粗品7968.6222mg。 結(jié)論 該方法克服了矽肺病人肺灌洗液大容量和吸入金屬物極多的問(wèn)題，可以用來(lái)粗提HPS。 第三部分凝膠色譜提純HPS 目的 利用凝膠色譜提純HPS粗品。 方法 摸索提純HPS條件，制備SEPHROSE凝膠色譜柱。 結(jié)果 提取HPS色譜條件：層析柱：Sephadex LH-20凝膠層析柱(15mm×400mm)。把正丁醇萃取的粗品PS用氯仿-甲醇(1∶1／v∶v)溶解后上樣。流動(dòng)相：氯仿-甲醇(1∶1／v∶v)，流速：1.0ml／min；收集220nm濾片以PC為主峰液體。將收集液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，40℃，15min，乙醇洗出，超凈臺(tái)抽風(fēng)吹干，得到純品HPS。水浴溫度為44℃。 純化的HPS純品12646.76 mg。 結(jié)論 本產(chǎn)品天然HPS純序高。實(shí)驗(yàn)方法可行。 第四部分HPS化學(xué)成分分析 目的 分析和比較HPS和其他PS制劑的化學(xué)組分。 方法 1 HPS的各組分含量測(cè)定：總磷脂含量測(cè)定采用硫酸—過(guò)氯酸消化孔雀綠顯色法；蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用考馬斯亮蘭法、膽固醇和甘油三酯含量測(cè)定均按酶比色法進(jìn)行操作。 2 HPS中磷脂的各組分分析：采用高效液相色譜法(High Performance Liquid Phase Chromatography，HPLC)。 3所得數(shù)據(jù)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。 結(jié)果 1 8例病人肺灌洗液共約192000ml。利用前述離心、透析、萃取、色譜提純的方法，8例病人總共提取12646.76mg。HPS產(chǎn)物中各化學(xué)成分分別為：磷脂(95.74±1.95)％，甘油三脂(1.09±0.69)％，膽固醇(1.02±0.21)％，蛋白質(zhì)(2.15±1.03)％。 2 HPS的各磷脂組分的構(gòu)成比為：磷脂酰膽堿PC(80.43±5.05％)、磷脂酰甘油PG(6.67±0.45％)、磷脂酰乙醇胺PE(6.78±2.02％)、磷脂酰肌醇PI(3.77±2.20％)、磷脂酰絲氨酸PSE(2.35±1.61％)。HPS中磷脂含量達(dá)到95％以上其中PC含量達(dá)到80.43％，而TC、TG、蛋白質(zhì)含量均較低，磷脂酰膽堿含量較高且磷脂成分比較齊全，說(shuō)明HPS中磷脂成分較齊全，符合PS制劑的要求。 3本實(shí)驗(yàn)所采用的HPLC，各磷脂組分的保留時(shí)間和峰面積的重復(fù)性好、精密度高，可用來(lái)動(dòng)態(tài)分析生產(chǎn)過(guò)程中各磷脂組分的含量，在HPS制備過(guò)程中和制備后及時(shí)分析是確保產(chǎn)品質(zhì)量可靠性的關(guān)鍵，對(duì)提高HPS的生產(chǎn)質(zhì)量具有重要意義。 結(jié)論 本研究制備的HPS產(chǎn)物中化學(xué)組分含量和磷脂組分的構(gòu)成符合PS制劑標(biāo)準(zhǔn)。 第五部分親和層析提純SP-A 目的 提取矽肺病人灌洗液中的SP-A。 方法 制備親和層析柱，摸索提純SP-A的條件。利用ELISA法鑒定SP-A。利用色譜譜圖計(jì)算SP-A含量。和光度計(jì)測(cè)定的總蛋白含量對(duì)比，計(jì)算產(chǎn)物的純度。 結(jié)果 本方法每人次提純SP-A含量為1.3692±0.3885g。純度達(dá)到92.20±7.00％。對(duì)SP-A制備的方法和工藝過(guò)程進(jìn)行了研究，確定了制備SP-A的最佳條件為：提純：制備Sepharose 4B-抗人SP-AmAbs親和層析柱：(15mm×400mm)。0.1Mol／LpH2.4甘氨酸—HCl緩沖液，流速1ml／min，收集解吸附下來(lái)的成分，沈出液OD_(280)＜0.02為止。立即以1Mol／LNaHCO_3中和到pH7.0，以免蛋白變性。 結(jié)論 萃取、透析和色譜分離的方法在大容量肺灌洗液體提取SP-A可行。用萃取、透析和色譜分離的方法能較好地提純肺表面活性物質(zhì)蛋白A。 第六部分肺表面活性物質(zhì)的體外活性測(cè)定 目的 了解HPS的表面活件特征和加入SP-A后的效果。 方法 1采用JM04動(dòng)態(tài)膜壓記錄儀測(cè)定HPS的表面活性特征。 2所得數(shù)據(jù)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。 結(jié)果 測(cè)得代表HPS降低表面張力和膜穩(wěn)定性的指標(biāo)如下：蒸餾水表面張力改變的數(shù)量，壓縮80％再?gòu)堥_(kāi)到原有面積，由原先的14.16±2.07mN／m變化到1.13mN／m，變化幅度達(dá)到13.04±0.40mN／m。加入HPS 50ul后，由21.38±2.20mN／m降低到0.74±0.08mN／m，變化幅度達(dá)到20.64 mN／m。較大地改變了膜表面張力。給蒸餾水加入HPS+SP-A后，表面張力在膜表面積壓縮和張開(kāi)過(guò)程中，由25.67±2.91mN／m降低到0.51±0.17mN／m，降低幅度達(dá)到25.16mN／m。較前明顯改變了膜表面張力。三組數(shù)據(jù)方差分析顯示組間均數(shù)均有差異，P為0.000，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 本方法提純的HPS純品具有改變蒸餾水表面張力作用，在膜壓縮過(guò)程中保持穩(wěn)定性。加入SP-A，在蒸餾水表面膜壓縮過(guò)程中，降低表面張力的作用優(yōu)于單純HPS制品。提示SP-A優(yōu)化了HPS在蒸餾水表面的分布，進(jìn)一步降低了膜表面張力。因此，本法提取的HPS和SP-A可用于人與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床替代治療的應(yīng)用和研究。 HPS制劑加入蒸餾水后可有效降低表面張力，具備PS的表面活性特征。SP-A可以協(xié)助HPS進(jìn)一步降低表面張力。 第七部分矽肺病人和肺泡蛋白沉積癥一例肺灌洗液HPS水平比較 目的 側(cè)證矽肺病人不同時(shí)期HPS水平變化。 方法 利用前述提取HPS和SP-A方法，提取矽肺病人24人(灌洗液12000ml／人)和肺泡蛋白沉積癥一例肺灌洗液(27000m1)中HPS和SP-A并比較之。 結(jié)果 該P(yáng)AP病人肺內(nèi)HPS、蛋白質(zhì)、SP-A的水平均較Ⅰ期矽肺病人高2-3倍之多。達(dá)到HPS 287.4mg／l，Protein 4.42g／l，SP-A 2.89g。Ⅰ期矽肺病人各項(xiàng)數(shù)據(jù)分另4是HPS 137.13±17.40mg／l，Protein 1.62±0.45 g／l，，SP-A 0.95±0.20g。相對(duì)而言，矽肺病人肺內(nèi)堆積的表面活性物質(zhì)含量不足該例PAP病人的30％。Ⅱ期HPS32.6±3.89 mg／l，Protein0.98±0.39g／l，SP-A0.61±0.16g，Ⅲ期HPS29.9±6.43mg／l，Protein 0.43±0.11g／l，SP-A 0.52g±0.23g。矽肺病人肺內(nèi)堆積的表面活性物質(zhì)逐期下降。三期數(shù)據(jù)方差分析顯示組間均數(shù)均有差異，P為0.000，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 矽肺發(fā)病初期，表面活性物質(zhì)大量堆積。但是數(shù)量?jī)H為該P(yáng)AP病人肺泡內(nèi)表面活性物質(zhì)堆積數(shù)量的30％。隨期別增加，肺內(nèi)堆積的表面活性物質(zhì)水平下降。 第八部分大容量肺灌洗后肺內(nèi)PS恢復(fù)情況 目的 了解全肺大容量灌洗術(shù)術(shù)后肺內(nèi)HPS水平變化。 方法 給矽肺病人行全肺大容量灌洗，鑒定術(shù)后不同時(shí)間肺內(nèi)洗出液體的HPS濃度，了解術(shù)后HPS的變化。間接反映肺泡Ⅱ型細(xì)胞代償性分泌HPS增加的情況。 結(jié)果 三個(gè)時(shí)間段的數(shù)據(jù)方差分析顯示組間均數(shù)均有差異，P為0.000，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示三期病人三個(gè)時(shí)間段比較都有恢復(fù)。 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期矽肺病人肺內(nèi)PS水平分別在263.4±20.37mg／l、183.8±19.34mg／l、77.7±01.94mg／l。以此為基礎(chǔ)，沒(méi)有繼續(xù)灌洗(丟失)，Ⅰ期矽肺病人術(shù)后10分鐘檢測(cè)肺內(nèi)PS水平即達(dá)到460.4±22.03mg／l，30分鐘達(dá)到842.8±34.17mg／l，P為0.000。Ⅱ期矽肺病人術(shù)后10分鐘檢測(cè)肺內(nèi)PS水平達(dá)到191.2±18.9mg／l，術(shù)后30分鐘達(dá)到425.8±20.04mg／l，與術(shù)后即時(shí)水平比較P均為0.000。Ⅲ期矽肺病人術(shù)后30分鐘檢測(cè)肺內(nèi)PS水平達(dá)到81.5±03.40mg／l，與術(shù)后即時(shí)77.7±01.94mg／1的水平比較P為0.000，雖有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明出現(xiàn)代償，但是總體水平仍然高出不多，不能明顯改善病人灌洗后呼吸困難的情況，不能起到多少實(shí)際效果。 結(jié)論 灌洗可以引起PS丟失。但I(xiàn)期矽肺病人灌洗后可以在很短時(shí)間(＜10min)出現(xiàn)代償并恢復(fù)肺內(nèi)PS水平。Ⅱ期矽肺病人PS丟失，10min左右還沒(méi)有出現(xiàn)明顯代償情況。大約30min出現(xiàn)代償并恢復(fù)肺內(nèi)PS水平。Ⅲ期矽肺病人術(shù)后30分鐘出現(xiàn)了代償?shù)珶o(wú)實(shí)際意義。 小結(jié) 1本研究運(yùn)用ELISA方法和離心方法初步驗(yàn)證了大容量肺灌洗液中含有高水平的HPS、SP-A。 2本研究?jī)?yōu)選了透析、化學(xué)萃取和離心的最佳條件為：以初離心：3000g，15min；3KD孔徑透析袋濃縮，高速離心條件10000g，15min；化學(xué)試劑正丁醇為最佳條件。利用該條件從6人次單肺灌洗液(各12000 ml)中提取了PS粗品7968.6222mg。 3本研究利用透析、化學(xué)萃取、色譜提純方法分離提取HPS，獲得提純的HPS12646.76 mg。對(duì)HPS純品制備的方法和工藝過(guò)程進(jìn)行了研究，確定了制備HPS的最佳條件為：提純：層析柱：Sephadex LH-20凝膠層析柱(15mm×400mm)。把正丁醇萃取的粗品PS用氯仿-甲醇(1∶1／v∶v)溶解后上樣。流動(dòng)相：氯仿-甲醇(1∶1／v∶v)，流速：1.0ml／min；收集220nm濾片以PC為主峰的液體，將收集液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，44℃，15min。乙醇洗出，超凈臺(tái)抽風(fēng)吹干，得到純品PS，水浴溫度44℃。 4本研究分析了HPS制劑的化學(xué)組分和磷脂的各組分。8例病人肺灌洗液共約192000ml。利用離心、透析、萃取、色譜提純的方法，8例病人總共提取12646.76mg。人均提取HPS為1580.85mg。HPS產(chǎn)物中各化學(xué)成分分別為：磷脂(95.74±1.95)％，甘油三脂(1.09±0.69)％，膽固醇(1.02±0.21)％，蛋白質(zhì)(2.15±1.03)％。 HPS的各磷脂組分的構(gòu)成比為：磷脂酰膽堿PC(80.43±5.05％)、磷脂酰甘油PG(6.67±0.45％)、磷脂酰乙醇胺PE(6.78±2.02％)、磷脂酰肌醇PI(3.77±2.20％)、磷脂酰絲氨酸PSE(2.35±1.61％)。HPS中磷脂含量達(dá)到95％以上，其中PC含量達(dá)到80.43％，而TC、TG、蛋白質(zhì)含量均較低，磷脂酰膽堿含量較高且磷脂成分比較齊全，說(shuō)明HPS中磷脂成分較符合人體需要。 5本研究利用色譜提純方法分離提取SP-A。對(duì)SP-A制備的方法和工藝過(guò)程進(jìn)行了研究，確定了制備SP-A的最佳條件為：提純：制備Sepharose 4B-抗人SP-AmAbs親和層析柱：(15mm×400mm)。0.1Mol／L pH2.4甘氨酸—HCl緩沖液，流速1ml／min，收集解吸附下來(lái)的成分，洗出液OD_(280)＜0.02為止。立即以1Mol／L NaHCO3中和到pH7.0，以免蛋白變性。本方法每人次提純SP-A含量為1.3692±0.3885g。純度達(dá)到92.20±7.00％。萃取、透析和色譜分離的方法在大容量肺灌洗液體提取SP-A可行。用萃取、透析和色譜分離的方法能較好地提純肺表面活性物質(zhì)蛋白A。 6測(cè)得代表HPS降低表面張力和膜穩(wěn)定性的指標(biāo)如下：蒸餾水表面張力改變的數(shù)量，壓縮80％再?gòu)堥_(kāi)到原有面積，由原先的14.16±2.07mN／m變化到1.13±0.40mN／m，變化幅度達(dá)到13.03mN／m。加入HPS 50ul后，由21.38±2.20mN／m降低到0.74±0.08mN／m，變化幅度達(dá)到20.64 mN／m。較大地改變了膜表面張力。給蒸餾水加入HPS+SP-A后，表面張力在膜表面積壓縮和張開(kāi)過(guò)程中，由25.67±2.91mN／m降低到0.51±0.17mN／m，降低幅度達(dá)到25.16mN／m。較前明顯改變了膜表面張力。本方法提純的HPS純品加入蒸餾水后可有效降低表面張力，具備PS的表面活性特征。SP-A可以協(xié)助PS進(jìn)一步降低表面張力。 7本文比較了矽肺病人和肺泡蛋白沉積癥的患者HPS、SP-A水平。該P(yáng)AP病人肺內(nèi)HPS、蛋白質(zhì)、SP-A的水平均較Ⅰ期矽肺病人高2-3倍之多。達(dá)到HPS287.4mg／l，Protein 4.42g／l，SP-A 2.89g。Ⅰ期矽肺病人各項(xiàng)數(shù)據(jù)分別是HPS137.13±17.40 mg／l，Protein 1.62±0.45 g／l，SP-A 0.95±0.20g。相目對(duì)而言，矽肺病人肺內(nèi)堆積的表面活性物質(zhì)含量不足該例PAP病人的30％。Ⅱ期HPS32.6±3.89mg／l，Protein 0.98±0.39g／l，SP-A0.61±0.16g，Ⅲ期HPS29.9±6.43mg／l，Protein 0.43±0.11g／l，SP-A 0.52g±0.23g。矽肺病人肺內(nèi)堆積的表面活性物質(zhì)逐期下降。 矽肺發(fā)病初期，表面活性物質(zhì)堆積。但是數(shù)量?jī)H為PAP病人肺泡內(nèi)表面活性物質(zhì)堆積數(shù)量的30％。隨期別增加，各種物質(zhì)含量持續(xù)下降。 8三期病人術(shù)后三個(gè)時(shí)間段(0、10、30min)比較PS水平都有恢復(fù)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期矽肺病人肺內(nèi)PS水平分別在263.4±20.37mg／l、183.8±19.34mg／l、77.7±01.94mg／l。以此為基礎(chǔ)，沒(méi)有繼續(xù)灌洗(丟失)，Ⅰ期矽肺病人術(shù)后10分鐘檢測(cè)肺內(nèi)PS水平即達(dá)到460.4±22.03mg／l，30分鐘達(dá)到842.8±34.17mg／l，P為0.000。Ⅱ期矽肺病人術(shù)后10分鐘檢測(cè)肺內(nèi)PS水平達(dá)到191.2±18.9mg／l，術(shù)后30分鐘達(dá)到425.8±20.04mg／l，與術(shù)后即時(shí)水平比較P均為0.000。Ⅲ期矽肺病人術(shù)后30分鐘檢測(cè)肺內(nèi)PS水平達(dá)到81.5±03.40mg／l，與術(shù)后即時(shí)77.7±01.94mg／1的水平比較P為0.000，雖有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明出現(xiàn)代償，但是總體水平仍然高出不多，不能明顯改善病人灌洗后呼吸困難的情況，不能起到多少實(shí)際效果。 灌洗可以引起PS丟失，但Ⅰ期矽肺病人灌洗后可以在很短時(shí)間(＜10min)出現(xiàn)代償并恢復(fù)肺內(nèi)PS水平。Ⅱ期矽肺病人PS丟失，10min左右還沒(méi)有出現(xiàn)明顯代償情況。大約30min出現(xiàn)代償并恢復(fù)腫內(nèi)PS水平。Ⅲ期矽肺病人術(shù)后30分鐘出現(xiàn)了代償?shù)珶o(wú)實(shí)際意義。
【圖文】：

6398士9134.22士6.5864.04士6485士6759.76士12.7826.81士1.8934.3528.190.0880.0010.00沉淀顯微鏡檢見(jiàn)圖1一1、圖1一2論矽肺機(jī)理研究已有較大的進(jìn)展，矽塵進(jìn)入肺泡后，以炎性細(xì)胞為分泌的趨化因子、氧自由基和細(xì)胞因子，導(dǎo)致肺泡炎和纖維化。質(zhì)是磷脂與表面活性蛋白共同組成復(fù)合物，SP一A是4種表面活性蛋表面活性物質(zhì)由n型肺泡上皮細(xì)胞合成和分泌，對(duì)維持肺的正常的生理學(xué)意義。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，矽塵可引起SP一A增加，伴有肺H型協(xié)一護(hù)

第三部分凝膠色譜純化PS洗脫流速應(yīng)根據(jù)情況而定，最大流速約5耐/min，建議流速為2ml/min。較低的流速，具有較高的分辯率。按0D二〔，出峰收集所要的磷脂。1.2.6再生凝膠再生通常是先用2一3個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行清洗。2結(jié)果8例病人肺灌洗液共約192000ml。利用前述離心、透析、萃取、色譜提純的方法，析見(jiàn)下圖8例病人總共提取HPS純品12646.76mg。粗品、純品色譜譜圖對(duì)照分
【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R341

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉紅梅;涂健;潘玲;祁克宗;;豬親水性肺表面活性蛋白及其天然免疫機(jī)制[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2012年06期

本文編號(hào)：2551486