【摘要】：目的:研究硒化乳酸菌胞外多糖對體外培養(yǎng)小鼠脾淋巴細胞分泌NO,IL-4及IL-12的影響。方法:分離制備了小鼠脾淋巴細胞,用Griess法檢測NO含量,雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法檢測IL-4和IL-12含量。結(jié)果:當多糖質(zhì)量濃度為400μg/mL時,硒化EPS對ConA刺激的T淋巴細胞NO分泌量高于EPS。培養(yǎng)4 h后上清液中NO濃度顯著升高,培養(yǎng)8 h達到最高。硒化EPS可抑制小鼠脾淋巴細胞分泌IL-4,400μg/mL硒化EPS對于ConA刺激的小鼠T淋巴細胞IL-12生成量影響最為顯著。結(jié)論:硒化EPS在一定程度上影響小鼠脾淋巴細胞免疫功能,這可能是其免疫調(diào)控機理之一。
【圖文】：

EPSConA-EPS050100200400多糖質(zhì)量濃度/μg·mL-150403020100NO濃度/μmo·lL-1abab注：a：與空白組相比有顯著差異（p<0.05）；b：與EPS組相比有顯著差異（p<0.05）。下同。圖1不同質(zhì)量濃度硒化EPS對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞分泌NO的影響Fig.1EffectofSe-EPSwithdifferentconcentrationonNOinductionofspleenlymphocyteactivitiedbyConAinvitroLPS-硒化EPSLPS-EPS6050403020050100200400多糖質(zhì)量濃度/μg·mL-1NO濃度/μmo·lL-1圖2不同質(zhì)量濃度硒化EPS對LPS誘導的小鼠脾淋巴細胞分泌NO的影響Fig.2EffectofSe-EPSwithdifferentconcentrationonNOinductionofspleenlymphocyteactivitiedbyLPSinvitroaaab1.2實驗動物ICR小鼠，體重18～22g，雄性，，8周；寧波大學動物中心提供。1.3儀器與設(shè)備MCO-18AICCO2培養(yǎng)箱，日本SANYON；680型自動酶標儀，美國Thermo公司；飛鴿TDL-40C低速離心機，上海安亭儀器廠；倒置顯微鏡，日本Olympus公司。1.4試驗方法1.4.1小鼠脾淋巴細胞懸液制備脫臼處死小白鼠，75%酒精浸泡5min。無菌取小鼠脾臟，研磨，200目尼龍網(wǎng)過濾，1000r/min離心10min。3倍體積紅細胞裂解液裂解2min去除紅細胞，無血清培養(yǎng)基洗滌2次。臺盼藍染色確定細胞存活率大于95%。37℃，5%CO2培養(yǎng)2h去除貼壁細胞，調(diào)整細胞濃度2×106cells/mL[13]。1.4.2NO測定分別向細胞懸液中加入ConA（終質(zhì)量濃度為5μg/mL）和LPS（終質(zhì)量濃度為200ng/mL），接種到96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔100μL，再分別加入EPS和硒化EPS，使終質(zhì)量濃度為50，100，200，400μg/mL，另設(shè)ConA、LPS對照孔，細胞調(diào)零孔（各種處理均作3個平行孔）。3

第14卷第3期ckseEPS403020100481224作用時間/h圖3不同時間下硒化EPS對conA誘導的小鼠脾淋巴細胞分泌NO的影響Fig.3EffectofSe-EPSonNOinductionofspleenlymphocyteactivatedbyconAinvitroatvarioustimeNO濃度/μmo·lL-150403020100ckseEPS481224作用時間/h圖4不同時間下硒化EPS對LPS誘導的小鼠脾淋巴細胞分泌NO的影響Fig.4EffectofSe-EPSonNOinductionofspleenlymphocyteactivatedbyLPSinvitroatvarioustimeConA-SeConA-EPSA450nmA450nmLPS-SeLPS-EPS多糖質(zhì)量濃度/μg·mL-1圖5不同濃度硒化EPS對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞分泌IL-4的影響Fig..5EffectofSe-EPSwithdifferentconcentrationonIL-4inductionofspleenlymphocyteactivitiedbyConAinvitro圖6不同濃度硒化EPS對LPS誘導的小鼠脾淋巴細胞分泌IL-4的影響Fig.6EffectofSe-EPSwithdifferentconcentrationonIL-4inductionofspleenlymphocyteactivitiedbyLPSinvitro多糖質(zhì)量濃度/μg·mL-12.1.2培養(yǎng)時間對NO分泌的影響如圖3、圖4EPS和硒化EPS對于ConA刺激的T淋巴細胞和LPS刺激的B淋巴細胞NO分泌隨時間的變化趨勢一致。與對照組相比，培養(yǎng)4h后上清液中NO濃度顯著升高，培養(yǎng)8h達到最大，隨后降低。培養(yǎng)24h后細胞培養(yǎng)上清液中NO濃度與對照組相比無顯著差異。2.2EPS和硒化EPS對體外培養(yǎng)小鼠脾淋巴細胞分泌IL-4的影響如圖5、圖6EPS和硒化EPS對ConA活化的T淋巴細胞分泌IL-4起抑制作用，低濃度硒化EPS可增加IL-4分泌量，隨著濃度的升高抑制作用趨于明顯，高濃度EPS可顯著抑制IL-4分泌。對于LPS活化的B淋巴細胞，硒化EPS除在200μg/mL濃度下可升高IL-4分泌量外，主要起抑制作用，
【作者單位】： 寧波大學海洋學院食品系;南京師范大學食品系;
【基金】：浙江省自然基金重點項目(No.Z3110211) 國家自然科學基金項目(No.41276121) 寧波市重大攻關(guān)項目(No.2011C11017)
【分類號】：R329.2

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本文編號：2550140