【摘要】： 隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、人們交往的增多,酒的消費(fèi)也顯著增加。酒促進(jìn)交往的同時(shí),經(jīng)皮膚、呼吸道、消化道吸收,引起機(jī)體心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng),特別是神經(jīng)系統(tǒng)的損害,后者常常表現(xiàn)為抑郁、記憶力減退以及運(yùn)動(dòng)功能障礙等癥狀。 流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),抑郁癥近年呈明顯的上升趨勢(shì),這除了與生活壓力增加、工作緊張等原因有關(guān)外,飲酒也很可能是部分人群產(chǎn)生抑郁的原因之一。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)抑郁患者出現(xiàn)5-羥色胺(serotonin,5-HT)體系的功能障礙,表現(xiàn)為5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(serotonin transporter, SERT)的明顯減少。SERT是位于5-HT能神經(jīng)末梢的一種膜蛋白,通過再攝取突觸間隙的5-HT而終止5-HT的作用;它的降低除反映5-HT能神經(jīng)元的功能障礙外,還提示5-HT神經(jīng)元所支配腦區(qū)內(nèi)5-HT能神經(jīng)纖維數(shù)目的減少。因此SERT是研究5-HT能神經(jīng)元功能狀態(tài)的重要指標(biāo)。 中腦邊緣多巴胺能體系(mesolimbic dopaminergic system)在藥物成癮過程中起著十分重要的作用。腦內(nèi)多巴胺(dopamine, DA)能神經(jīng)元的功能活動(dòng)有賴于多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(dopamine transporter, DAT)的正常表達(dá)。DAT是位于DA能神經(jīng)末梢突觸前膜上的膜蛋白,能夠特異性的識(shí)別DA,將釋放到突出間隙的神經(jīng)遞質(zhì)- DA快速的再攝取到突觸前神經(jīng)末梢內(nèi),從而終止神經(jīng)信息的傳導(dǎo)。研究發(fā)現(xiàn)DAT是可卡因等一些精神興奮藥物的作用靶點(diǎn)。有學(xué)者通過對(duì)可卡因成癮者的尸檢材料研究發(fā)現(xiàn),可卡因成癮者腦內(nèi)紋狀體DAT結(jié)合位點(diǎn)明顯增加;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了DAT結(jié)合點(diǎn)增加的結(jié)果。這些研究均提示DAT是可卡因成癮的一種狀態(tài)指標(biāo)。酗酒成癮是否也如可卡因等精神興奮藥物一樣提高DAT的表達(dá),目前尚無(wú)研究。 本研究利用免疫放射自顯影法、免疫細(xì)胞化學(xué)、形態(tài)測(cè)量學(xué)、免疫印跡、流式細(xì)胞技術(shù)及透射電鏡等方法,通過對(duì)酗酒人腦標(biāo)本及乙醇處理大鼠5-HT能和DA能體系不同腦區(qū)的研究,分析酗酒和乙醇對(duì)SERT和DAT表達(dá)的影響,期望為酗酒者癥狀的解釋及酒精成癮提供實(shí)驗(yàn)形態(tài)學(xué)依據(jù)。 第一部分:SERT在人腦不同區(qū)域分布的免疫放射自顯影研究 目的:定量分析人腦標(biāo)本不同區(qū)域內(nèi)SERT的免疫反應(yīng)強(qiáng)度,1.為研究酗酒人腦標(biāo)本SERT蛋白的改變提供適宜的觀察部位和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù); 2.為臨床應(yīng)用SERT配基檢測(cè)抑郁等疾病選擇參照區(qū)提供神經(jīng)解剖學(xué)依據(jù)。 方法:收集5例男性人腦標(biāo)本,依據(jù)人腦圖譜定位、取腦,爾后切成3～5mm厚的腦片,經(jīng)甲醛固定、常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋,開始切片進(jìn)行免疫放射自顯影研究,顯影、定影,以Luxol Fast Blue復(fù)染切片,掃描儀掃描膠片(300dpi),以TIFF格式儲(chǔ)存,用AIS軟件測(cè)量感興區(qū)密度即SERT免疫反應(yīng)強(qiáng)度(顯微鏡下觀察復(fù)染切片,用鼠標(biāo)勾畫圖像相應(yīng)核團(tuán)邊界,以125I-standards校正的14C-standards曲線,測(cè)量邊界內(nèi)圖像密度,計(jì)算膠片圖像與切片對(duì)應(yīng)核團(tuán)的125I強(qiáng)度。所得值減去對(duì)照組相同核團(tuán)背景標(biāo)記值為特異性標(biāo)記結(jié)果(nCi/mg)。 結(jié)果:1. SERT標(biāo)記一般觀察所觀察的腦區(qū)中,SERT免疫反應(yīng)強(qiáng)標(biāo)記信號(hào)主要分布在腦干的中縫核區(qū)及中腦黑質(zhì);在端腦的殼核、尾狀核以及扣帶回(特別是膝周皮質(zhì))也存在SERT標(biāo)記信號(hào),強(qiáng)度明顯低于前者;端腦的額葉、枕葉SERT標(biāo)記信號(hào)較弱,小腦皮質(zhì)在觀察腦區(qū)中SERT免疫反應(yīng)強(qiáng)度標(biāo)記最低;2. SERT標(biāo)記強(qiáng)度分析所觀察的各個(gè)腦區(qū)SERT免疫反應(yīng)強(qiáng)度的測(cè)量結(jié)果顯示,中縫背核為2.99±0.89,黑質(zhì)為1.73±0.36,尾狀核為0.31±0.07,殼為0.28±0.06,額葉皮質(zhì)為0.11±0.05,枕葉皮質(zhì)為0.13±0.08,扣帶回為0.55±0.02,小腦皮質(zhì)為0.06±0.04。小腦皮質(zhì)是各個(gè)腦區(qū)SERT免疫反應(yīng)強(qiáng)度標(biāo)記最低的部位,僅占中縫背核、黑質(zhì)、尾狀核、殼、額葉皮質(zhì)、枕葉皮質(zhì)及扣帶回的1/49.83、1/28.83、1/5.17、1/4.67、1/1.83、1/2.17和1/9.17。 結(jié)論:1. SERT蛋白在5-HT能神經(jīng)元投射源區(qū)中以中腦中縫背核表達(dá)最高。在5-HT能神經(jīng)元投射靶區(qū)中以中腦黑質(zhì)、腹側(cè)被蓋區(qū)表達(dá)最明顯;扣帶回前部膝周皮質(zhì)次之;小腦皮質(zhì)和胼胝體表達(dá)最低。2.小腦皮質(zhì)含有極少量SERT蛋白,如果放射性配基選擇適當(dāng),應(yīng)是臨床配基顯像技術(shù)檢測(cè)SERT變化診斷相關(guān)疾病的理想?yún)⒄諈^(qū)。 第二部分:SERT在酗酒人腦標(biāo)本的表達(dá)改變 目的:觀察酗酒人腦標(biāo)本不同區(qū)域內(nèi)SERT免疫反應(yīng)強(qiáng)度,判定SERT蛋白含量的改變。 方法:收集10例男性腦標(biāo)本,對(duì)照組和酗酒組各5例,其余同上。 結(jié)果:1. SERT標(biāo)記一般觀察所觀察的腦區(qū)中,健康組人腦標(biāo)本SERT強(qiáng)標(biāo)記信號(hào)在腦橋頭側(cè)主要集中分布在與中縫核群相同的位置,在腦橋基底部和被蓋的其它區(qū)域的標(biāo)記信號(hào)散在且較弱;在中腦水平除中縫核群所處位置的SERT強(qiáng)標(biāo)記信號(hào)外,紅核周圍以及黑質(zhì)的標(biāo)記信號(hào)也較強(qiáng);在扣帶回SERT強(qiáng)標(biāo)記信號(hào)主要分布于其前部特別是膝周皮質(zhì)。上述SERT的標(biāo)記信號(hào)強(qiáng)度在酗酒組的相同腦區(qū)呈現(xiàn)不同程度的減弱。2. SERT標(biāo)記強(qiáng)度分析定量分析發(fā)現(xiàn)SERT免疫反應(yīng)含量強(qiáng)度分別為,健康組中縫正中核(median raphe nucleus,MnR)1.89±0.62、中縫背核(dorsal raphe nucleus,DRN)的中縫背核束間部(dorsal raphe nucleus - interfascicular part,DRI)2.32±0.89、中縫背核尾側(cè)部(dorsal raphe nucleus - caudal part,DRC)2.54±0.42、中縫背核腹側(cè)部(dorsal raphe nucleus  ventral part,DRV)3.26±0.98、中縫背核背側(cè)部(dorsal raphe nucleus  dorsal part,DRD)2.66±0.77、中腦黑質(zhì)(substantia nigra,SN)1.73±0.36和扣帶回前部膝周皮質(zhì)(pregenual anterior cingulate gyrus)0.55±0.02;酗酒組MnR、DRI、DRC、DRV、DRD、SN和扣帶回前部膝周皮質(zhì)的SERT免疫反應(yīng)含量強(qiáng)度分別為0.76±0.16,0.90±0.34,1.17±0.39,1.34±0.09,1.10±0.25、0.82±0.23和0.43±0.04。酗酒組SERT免疫反應(yīng)含量強(qiáng)度顯著均低于健康對(duì)照組(DRI、DRC、SN與扣帶回前部膝周皮質(zhì):P㩳0.01;MnR、DRV及DRD:P㩳0.05),數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腦橋網(wǎng)狀核嘴側(cè)部(pontine reticular nucleus - oral part,PnO)、丘系上區(qū)(supralemniscal region,B9)、中縫旁正中核(paramedian raphe nucleus,PMnR)以及腹側(cè)被蓋區(qū)(ventrotegmental area,VTA)的SERT免疫反應(yīng)強(qiáng)度在酗酒組與健康對(duì)照組之間無(wú)顯著差異(P㧐0.05)。 結(jié)論:酗酒人腦標(biāo)本中縫背核、黑質(zhì)以及扣帶回前部膝周皮質(zhì)SERT蛋白表達(dá)減少,提示酗酒者腦內(nèi)存在5-HT能神經(jīng)活動(dòng)的障礙。 第三部分:乙醇處理對(duì)大鼠腦內(nèi)5-HT能體系的影響 目的:觀察乙醇處理對(duì)大鼠腦內(nèi)不同區(qū)域SERT、5-HT和TPH表達(dá)的影響,判斷乙醇對(duì)腦內(nèi)5-HT能神經(jīng)體系的損害。 方法:選取3月齡體重為250—300 g Wistar大鼠120只,雄性(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),隨機(jī)分為對(duì)照組和乙醇處理組,對(duì)照組給予正常飲食飲水,乙醇處理組給予正常飼料,以20%酒精代替飲水。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別飼養(yǎng)6個(gè)月。1.免疫組織化學(xué)研究:深麻醉下,經(jīng)左心室-升主動(dòng)脈灌注生理鹽水100 ml,4℃4%多聚甲醛400 ml 1 h,開顱取腦,后固定4 h,蔗糖溶液4℃過夜。按需要把腦塊行冠狀位切片,免疫組織化學(xué)染色。①PB洗片;②抗原修復(fù);③3% H2O2及80%甲醇滅活;④10%正常羊血清室溫封閉;⑤入特異性I抗兔抗SERT多克隆抗體(1:10000)、兔抗5-HT多克隆抗體(紋狀體1:5000、中腦1:8000)、小鼠抗TPH的單克隆抗體(1:1000)4℃孵育;⑥分別入1:500生物素化的羊抗小鼠IgG和羊抗兔IgG室溫孵育;⑦入1:500的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素室溫孵育;每步間以TBS洗片3次,每次5 min;⑧DAB呈色、貼片、封片。光學(xué)顯微鏡下分別計(jì)數(shù)腦干中縫背核(B7)TPH和5-HT免疫反應(yīng)神經(jīng)元數(shù)目;測(cè)量TPH免疫反應(yīng)神經(jīng)元平均直徑;用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)分析所觀察腦區(qū)5-HT能免疫反應(yīng)神經(jīng)元或纖維各個(gè)指標(biāo)(5-HT、TPH和SERT)的靜態(tài)灰度值。2.流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè):將所需大鼠直接斷頭取腦,于冰板上取所需腦組織,放在120目不銹鋼網(wǎng)上,邊搓邊用生理鹽水沖洗,過濾、收集細(xì)胞懸液,500-800轉(zhuǎn)離心制備單細(xì)胞懸液。取單細(xì)胞懸液1×106/ ml,分別加入1:100鼠抗TPH單克隆抗體、兔抗SERT的多克隆抗體及兔抗5-HT的多克隆抗體各0.1 ml,室溫孵育, PBS洗滌,棄上清,分別加入羊抗鼠異硫氫熒光素(FITC-IgG)及羊抗兔藻紅素蛋白(PE-IgG)二抗工作液各0.1 ml,避光室溫孵育,加入PBS 10 ml離心同上,棄上清,加入PBS 0.1 ml經(jīng)500目銅網(wǎng)過濾后上機(jī)檢測(cè),電腦記錄,計(jì)數(shù)SERT、TPH和5-HT的表達(dá)量X-mode值。3. Western-Blot檢測(cè):所需大鼠斷頭取腦,冰板上用刀片取所需腦組織,加入蛋白裂解緩沖液,放入0℃水浴研磨,靜置1 h,4℃、15000 r/min離心25 min,取上清液。以考馬斯亮藍(lán)液在紫外-可見分光光度計(jì)上進(jìn)行蛋白質(zhì)定量,蛋白質(zhì)濃度(mg/ml)=樣品光密度值/標(biāo)準(zhǔn)管光密度值×2.5,蛋白樣品分裝,-80℃保存。①配制分離膠;②配制濃縮膠,清洗上樣孔,加入電泳緩沖液,加樣品;③進(jìn)行(120V)電泳3 h;④電轉(zhuǎn)移2 h至PVDF膜;⑤免疫顯色: 5%脫脂奶粉封閉2 h,1:500稀釋的小鼠抗TPH單克隆抗體、兔抗SERT多克隆抗體,4℃過夜,1:5000稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔或小鼠IgG37℃孵育1.5 h,ECL(增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光)試劑A液和B液滴加于膜上反應(yīng)1 min,將PVDF膜放入x光片暗盒,顯影,定影。底片經(jīng)掃描儀透掃后,美國(guó)UVP公司LabWorks 4.5軟件對(duì)Western條帶進(jìn)行定量分析,確定雜交條帶的相對(duì)吸光度值。4.透射電鏡觀察:將大鼠以水合氯醛麻醉,用含有1.5%多聚甲醛和2.5%戊二醛的固定液經(jīng)心灌注取腦,后固定2 h。以震動(dòng)切片機(jī)行冠狀位切片,收集含腦干中縫背核的切片,以1%的鋨酸后固定1 h。腦片經(jīng)梯度酒精脫水,丙酮置換后,以樹脂平板加芯包埋。光鏡下定位,取所要觀察的腦干中縫背核部位,以超薄切片機(jī)切片60 nm,日立H-7500透射電鏡觀察,加速電壓80Kv,采集電鏡圖像。 結(jié)果:1.免疫組織化學(xué)結(jié)果:正常大鼠5-HT能免疫反應(yīng)神經(jīng)元集中在中腦下丘節(jié)段,棕褐色,胞體大小均一,呈橢圓或圓形。SERT在正常大鼠腦內(nèi)分布呈粗細(xì)不等交叉成網(wǎng)的纖維狀,在中腦主要分布在中縫背核,在端腦分布廣泛,如扣帶回、紋狀體等。計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)目結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,乙醇處理組神經(jīng)元數(shù)目明顯減少,5-HT、TPH免疫反應(yīng)神經(jīng)元數(shù)目對(duì)照組中縫背核分別為24.57±0.70和24.86±1.28;乙醇處理組分別為15.89±0.67和16.00±1.00,兩組間t檢驗(yàn)有顯著差異性(P㩳0.01);測(cè)量細(xì)胞直徑結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,乙醇處理組神經(jīng)元直徑明顯變小,TPH免疫反應(yīng)神經(jīng)元直徑對(duì)照組中縫背核為12.13±1.05μm,乙醇處理組為11.44±1.21μm,比對(duì)照組減小5.69%(P㩳0.01);腹外側(cè)部對(duì)照組為11.84±1.50μm,乙醇處理組為10.82±1.69μm,比對(duì)照組減小8.61%(P㩳0.01);免疫反應(yīng)染色灰度值結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,乙醇處理組免疫反應(yīng)染色灰度值明顯升高,5-HT免疫反應(yīng)染色灰度值在對(duì)照組中縫背核(B7)和紋狀體分別為45.78±5.43和164.94±1.84,乙醇處理組分別為59.73±1.67和181.52±2.45,比對(duì)照組分別增高30.47%和10.05%(P0.05)。TPH免疫反應(yīng)染色灰度值對(duì)照組中縫背核(B7)為88.80±1.29,乙醇處理組為106.48±6.92,比對(duì)照組增高19.91%(P0.05)。SERT免疫反應(yīng)染色灰度值在對(duì)照組中縫背核(B7)、紋狀體和扣帶回分別為103.57±2.80、102.68±7.72和149.44±14.16,乙醇處理組分別為120.45±6.65、122.36±7.54和180.00±11.85,比對(duì)照組分別增高了16.30%、19.17%和20.45%( P0.05)。2.流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果:流式細(xì)胞儀間接免疫熒光法顯示,與對(duì)照組相比,乙醇處理組5-HT、TPH和SERT的表達(dá)量均明顯降低,對(duì)照組中腦下丘節(jié)段5-HT、TPH和SERT的表達(dá)量分別為439.2±19.99,638.30±1.37和553.36±15.13;乙醇處理組分別為378.25±6.84,595.20±13.51和513.11±12.05,三組數(shù)據(jù)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3. Western-Blot檢測(cè)結(jié)果:與對(duì)照組相比,乙醇處理組大鼠所觀察腦區(qū)SERT與β-actin條帶相對(duì)吸光度比值明顯降低,對(duì)照組大鼠扣帶回、紋狀體和中縫背核分別為0.0034±5.69×10~(-5)、0.0034±8.97×10~(-5)、0.0037±1.33×10~(-4);乙醇處理組大鼠分別為0.0031±6.97×10~(-5)、0.0032±1.35×10~(-5)、0.0034±1.53×10~(-4);具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。TPH與β-actin條帶相對(duì)吸光度比值在對(duì)照組大鼠中縫背核為0.0056±1.25×10~(-4);乙醇處理組為0.0052±8.6×10~(-5)。數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.透射電鏡觀察結(jié)果:經(jīng)過對(duì)中縫背核5-HT能神經(jīng)元進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,乙醇處理組神經(jīng)元溶酶體增多。 結(jié)論:1.乙醇處理引起大鼠腦內(nèi)中縫背核5-HT能免疫反應(yīng)神經(jīng)元數(shù)目減少、直徑變小。2.乙醇處理導(dǎo)致5-HT能體系SERT、5-HT和TPH表達(dá)降低。3.乙醇處理引起中縫背核神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)改變。 第四部分:乙醇處理對(duì)大鼠腦內(nèi)DA能體系的影響 目的:觀察乙醇處理組大鼠腦內(nèi)不同區(qū)域DAT和TH的表達(dá)變化,探討酒精成癮的可能機(jī)制,為戒斷酒精成癮提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:同第三部分。1.免疫組織化學(xué)研究:一抗為大鼠抗DAT多克隆抗體和小鼠抗TH單克隆抗體,二抗為羊抗大鼠IgG和羊抗小鼠IgG,觀察分析DA能免疫反應(yīng)神經(jīng)元或纖維TH和DAT,腦區(qū)為黑質(zhì)、紋狀體和扣帶回,其余同第三部分。2流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè):抗體為鼠抗TH單克隆抗體和羊抗鼠異硫氫熒光素(FITC-IgG),其余同第三部分。3. Western-Blot檢測(cè):所用抗體為小鼠抗TH單克隆抗體和大鼠抗DAT多克隆抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗小鼠或大鼠IgG,確定雜交條帶TH和DAT的相對(duì)吸光度值。其余同第三部分。4.透射電鏡觀察:取出所要觀察的部分中腦黑質(zhì),其余同第三部分。 結(jié)果:1.免疫組織化學(xué)結(jié)果:正常大鼠腦內(nèi)TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元主要集中在中腦黑質(zhì)及腹側(cè)被蓋區(qū),棕褐色,胞體圓形或橢圓形;DAT分布呈粗細(xì)不等交叉成網(wǎng)的纖維狀,在黑質(zhì)僅有較弱的陽(yáng)性免疫反應(yīng)標(biāo)記。與對(duì)照相比,乙醇處理組TH免疫反應(yīng)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少、直徑變小。TH神經(jīng)元數(shù)目對(duì)照組為45.95±8.11;乙醇處理組為30.29±4.85,減少程度達(dá)34.08%(P㩳0.01);TH神經(jīng)元對(duì)照組平均直徑為10.16±1.53μm,乙醇處理組為9.31±1.22μm,比對(duì)照組減小8.37%(P㩳0.01);與對(duì)照相比,乙醇處理組各指標(biāo)免疫染色灰度值降低。對(duì)照組大鼠黑質(zhì)和紋狀體TH灰度值為71.39±3.90和182.90±22.72,乙醇處理組為60.99±4.96和158.52±16.84,降低幅度分別達(dá)到14.57和6.66%(P0.05);DAT灰度值在對(duì)照組大鼠黑質(zhì)、紋狀體和扣帶回為59.78±1.95、88.72±3.62和96±2.18;乙醇處理組為53.85±1.26、68.75±3.53和84.38±1.92,降低幅度分別達(dá)到9.92%, 22.51%和12.21%(P0.05)。2.流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果:流式細(xì)胞儀間接免疫熒光法測(cè)得對(duì)照組中腦TH表達(dá)量為535.55±13.24;乙醇處理組為580.39±19.28,比對(duì)照組增高8.4%(P0.05)。3. Western-Blot檢測(cè)結(jié)果:DAT與β-actin條帶相對(duì)吸光度比值在對(duì)照組大鼠扣帶回、紋狀體、黑質(zhì)為:0.0034±6.61×10~(-5)、0.0034±5.59×10~(-5)、0.0035±8.12×10~(-5);乙醇處理組為0.0036±3.14×10~(-5)、0.0037±8.95×10~(-5)、0.0037±4.16×10~(-5);比值增高3.84%,7.39%和5.6%,各組數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)。TH與β-actin條帶相對(duì)吸光度比值在對(duì)照組大鼠黑質(zhì)和紋狀體為0.0036±9.63×10~(-5),0.0035±1.17×10~(-4);乙醇處理組為0.0045±75.11.33×10~(-4),0.0041±6.29×10~(-5),比值增高23.16%和16.89%,說明TH蛋白表達(dá)量增加。數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)4.透射電鏡觀察結(jié)果:經(jīng)過對(duì)黑質(zhì)DA能神經(jīng)元進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,乙醇處理組未見明顯改變。 結(jié)論:1.乙醇處理引起大鼠黑質(zhì)DA能免疫反應(yīng)神經(jīng)元數(shù)目減少、細(xì)胞變小。2.乙醇處理引起大鼠腦內(nèi)DAT表達(dá)增加,可能與酒精成癮有關(guān)。 第五部分:DAT在人腦不同區(qū)域分布的免疫放射自顯影研究 目的:定量分析人腦標(biāo)本不同區(qū)域內(nèi)DAT的免疫反應(yīng)強(qiáng)度:1.為酗酒人腦標(biāo)本DAT蛋白的研究提供適宜的觀察部位和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。2.為臨床應(yīng)用DAT配基檢測(cè)或研究相關(guān)疾病參照區(qū)的選擇提供神經(jīng)解剖學(xué)依據(jù)。 方法:同第一部分 結(jié)果:1. DAT標(biāo)記一般觀察所觀察的腦區(qū)中,DAT免疫反應(yīng)強(qiáng)標(biāo)記信號(hào)主要分布在中腦的黑質(zhì)、端腦的殼及尾狀核;另外端腦額葉、枕葉也可見弱的DAT標(biāo)記;而小腦皮質(zhì)標(biāo)記信號(hào)最弱;2. DAT標(biāo)記強(qiáng)度分析所觀察腦區(qū)測(cè)量結(jié)果顯示:DAT免疫反應(yīng)強(qiáng)度在黑質(zhì)為1.50±0.40,尾狀核為2.10±0.26,殼為1.54±0.18,額葉皮質(zhì)為0.63±0.38,枕葉皮質(zhì)為0.23±0.02,扣帶回為0.67±0.44,小腦皮質(zhì)為0.18±0.15(Fig. 2, Table 1)。可以看出小腦皮質(zhì)是各個(gè)腦區(qū)DAT免疫反應(yīng)強(qiáng)度標(biāo)記最低的部位,僅分別占黑質(zhì)、尾狀核、殼的1/8.33、1/11.67、1/8.56,而額葉皮質(zhì)、枕葉皮質(zhì)及扣帶回DAT的標(biāo)記強(qiáng)度則分別為小腦皮質(zhì)的3.50、1.28、和3.72倍;小腦皮質(zhì)DAT的標(biāo)記強(qiáng)度更接近白質(zhì)(胼胝體),其比值為1: 0.61。 結(jié)論:1. DAT分布在黑質(zhì)及其投射靶區(qū),在尾狀核、殼及黑質(zhì)表達(dá)最高。2.小腦皮質(zhì)含有極少量DAT蛋白,應(yīng)是臨床配基顯像技術(shù)檢測(cè)DAT變化診斷相關(guān)疾病首選的理想?yún)⒄諈^(qū)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 李秀均,鄧世雄;慢性酒精中毒者額葉結(jié)構(gòu)變化的研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2004年09期

2 劉興黨,林祥通,匡琴芳,國(guó)毓智,吳春英;5-羥色胺與多巴胺系統(tǒng)相互作用的研究[J];核技術(shù);2000年05期

3 項(xiàng)翠琴,汪根盛,傅慰祖,陳自強(qiáng);乙醇對(duì)大鼠腦紋狀體和海馬神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2004年02期

4 丁鏘;慢性酒精中毒的神經(jīng)精神癥狀及20例報(bào)告[J];河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年02期

5 包曉巖,高偉,齊麗,陳緋,王超;慢性酒精中毒致神經(jīng)系統(tǒng)損害39例分析[J];中國(guó)工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2004年01期

，

本文編號(hào)：2546776