【摘要】： 為增強(qiáng)婦科腫瘤化療中骨髓保護(hù)作用,結(jié)合間充質(zhì)干細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染效率較高,并且轉(zhuǎn)染后不影響其生物學(xué)特性的特點(diǎn),我們用灌流法聯(lián)合密度梯度離心法自胎盤(pán)組織中分離純化出間充質(zhì)干細(xì)胞,并研究構(gòu)建了攜帶多藥耐藥基因MDR1的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,以綠色熒光蛋白作為指示標(biāo)記,構(gòu)建的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PMX-MDR1-GFP與其外膜蛋白基因共同轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,獲得有感染性,復(fù)制缺陷的病毒顆粒后,轉(zhuǎn)染人胎盤(pán)源MSCs,通過(guò)綠色熒光顯微鏡觀測(cè)到報(bào)告基因GFP的表達(dá),WESTERN BLOT檢測(cè)外源MDR1表達(dá)的P-gp,均證實(shí)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PMX-MDR1- GFP成功轉(zhuǎn)染MSCs并表達(dá)了外源MDR1基因,柔紅霉素泵出試驗(yàn)證明轉(zhuǎn)染組細(xì)胞P-gp具有生物學(xué)活性。結(jié)果提示,mdr1逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可有效轉(zhuǎn)染人胎盤(pán)源MSC,轉(zhuǎn)染的外源基因不但可充分表達(dá),也可發(fā)揮正常的生理功能,為mdr1基因療法盡快應(yīng)用于臨床,打下了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),并提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【圖文】：

2．胎盤(pán) MSC 表面標(biāo)志流式動(dòng)態(tài)結(jié)果流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志，不表達(dá)造血細(xì)胞表面標(biāo)志即 CD34（HSPC 及內(nèi)皮細(xì)胞陽(yáng)性）、CD45（白細(xì)胞陽(yáng)性），，HLA-DR（MHC-II類分子）持續(xù)陰性，CD29 和 CD44（纖維蛋白和透明脂酸鹽的受體，基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)），CD73（即 SH-3、4）、CD105（即 SH-2）、CD166（間充質(zhì)細(xì)胞表達(dá)）和 UEA-1（內(nèi)皮細(xì)胞的表面標(biāo)志）持續(xù)為陽(yáng)性（圖 5）。

圖 6：胎盤(pán) MSC 細(xì)胞周期。檢測(cè)第 3、6 代細(xì)胞 DNA 含量，分析細(xì)可見(jiàn)符合干細(xì)胞特性，大部分細(xì)胞處于靜止期（G0/G1 期，96.66%和 9極少細(xì)胞處于增殖期（S 期，3.25%和 2.54%）。4．胎盤(pán) MSC 生長(zhǎng)曲線的繪制及對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期倍增時(shí)間每天細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制 MSC 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，計(jì)算倍增時(shí)間。由長(zhǎng)曲線可以看出，細(xì)胞在 2-4d 處于指數(shù)生長(zhǎng)期。根據(jù)公式計(jì)代 MSC 在指數(shù)生長(zhǎng)期的倍增時(shí)間為 22.5h（圖 7）。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R346

【共引文獻(xiàn)】

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3 李麗;于艷秋;;間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2009年03期

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本文編號(hào)：2538336