【摘要】： 為了研究谷氨酸(glutamic acid, Glu)對(duì)正常大鼠和完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant,CFA)炎癥大鼠下丘腦弓狀核(arcuate nucleus, ARC)神經(jīng)元自發(fā)放電的影響,本實(shí)驗(yàn)用電生理學(xué)方法,細(xì)胞外記錄離體下丘腦內(nèi)側(cè)基底部腦片ARC神經(jīng)元的單位放電,觀察Glu對(duì)正常大鼠以及CFA炎癥大鼠ARC神經(jīng)元放電的影響。并用NMDA受體激動(dòng)劑NMDA和拮抗劑MK-801分析其受體機(jī)制,還用免疫組織化學(xué)的方法觀察正常大鼠以及CFA大鼠ARC神經(jīng)元NMDAR1的表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:(1)ARC神經(jīng)元自發(fā)放電呈規(guī)則型、不規(guī)則型和簇狀型三種類型。(2)Glu、NMDA受體激動(dòng)劑NMDA可使正常大鼠下丘腦ARC神經(jīng)元放電頻率加快;NMDA受體拮抗劑MK-801能阻斷Glu、NMDA引起的ARC神經(jīng)元放電頻率加快的效應(yīng)。(3)CFA大鼠ARC神經(jīng)元自發(fā)放電頻率高于正常大鼠。(4)CFA大鼠ARC神經(jīng)元對(duì)Glu、NMDA反應(yīng)更為明顯,表現(xiàn)為ARC神經(jīng)元放電頻率顯著加快,藥物作用潛伏期縮短,藥物作用的持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)。MK-801能部分阻斷Glu、NMDA引起的CFA大鼠ARC神經(jīng)元放電頻率加快的效應(yīng)。但非NMDA受體拮抗劑CNQX不能阻斷。(5)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:CFA大鼠ARC神經(jīng)元NMDAR1表達(dá)量高于正常大鼠ARC神經(jīng)元NMDAR1的表達(dá)。 結(jié)果提示:下丘腦ARC神經(jīng)元的電活動(dòng)有谷氨酸機(jī)制(介導(dǎo)于NMDA受體)的參與。佐劑性炎癥時(shí),ARC神經(jīng)元對(duì)谷氨酸的反應(yīng)敏感化。
【圖文】：

7圖1 大鼠注射完全弗氏佐劑一周后的外觀圖Fig 1 The picture of rat 7 days after injection of CFA（二）離體下丘腦內(nèi)側(cè)基底部腦片的制備大鼠用 4%的水合氯醛（400 mg/kg）腹腔注射麻醉，迅速斷頭取腦，置于 0℃ ~ 4℃經(jīng) 95% O2+5% CO2混合氣體飽和的人工腦脊液（artificial cerebrospinalfluid, ACSF）中，將其修成約 5 mm×5 mm×5 mm 含弓狀核的下丘腦腦塊。用502 膠水粘在切片機(jī)底槽上，用振動(dòng)切片機(jī)緩慢切出厚約 400 μm 含弓狀核的下丘腦內(nèi)側(cè)基底部薄片。腦薄片在 25℃室溫下的 ACSF 中孵育 1 ~ 2 h 后移入記錄槽內(nèi)，用雙層尼龍網(wǎng)將腦薄片固定。記錄槽位于恒溫浴槽中央，容量約為 1 ml，采用全浸式灌流。用蠕動(dòng)泵將 ACSF 灌入記錄槽內(nèi)，流速為 3 ml/ min。灌流液的溫度由恒溫儀控制在33±1℃。ACSF成分采用Yamatomo[26]配方（10-3mol/ L）：NaCl 124，KCl 5

用玻璃微電極細(xì)胞外記錄ARC神經(jīng)元的自發(fā)單位放電，電極內(nèi)充灌2%滂胺天藍(lán)和0.5M醋酸鈉，尖端直徑為1.0μm左右，，直流阻抗為10 ~ 20 M 。根據(jù)ARC與第Ⅲ腦室的解剖關(guān)系（圖2），在手術(shù)顯微鏡下將玻璃微電極置于腦薄片表面，借助于微電極操縱器將玻璃微電極插入ARC內(nèi)。隨著微電極的插入，同時(shí)在示波器上觀察有無(wú)細(xì)胞放電。當(dāng)在示波器上觀察到自發(fā)單位放電以及從監(jiān)聽(tīng)器中聽(tīng)到“噼啪”放電聲時(shí)，便停止推進(jìn)電極，穩(wěn)定10 min后，將信號(hào)經(jīng)微電極放大器、前置放大器多級(jí)放大后，采用Powerlab/4sp（ADInstruments, Australia）數(shù)據(jù)處理器處理后輸入計(jì)算機(jī)（圖3）。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R33;R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2537002