【摘要】： 目的：構(gòu)建含有人SMN Tudor基因片段的原核表達質(zhì)粒，并在大腸桿菌中大量表達，從而與p100 Tudor片段結(jié)構(gòu)和功能進行比較。 方法：利用聚合酶鏈反應(PCR)方法，擴增出人SMN Tudor基因序列，并與原核表達載體pGEX-4T-1連接形成重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至作為質(zhì)粒的宿主菌大腸桿菌BL21株中，經(jīng)IPTG誘導融合蛋白表達并用還原型谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶特異性結(jié)合球珠純化融合蛋白。用同樣的方法表達p100 Tudor蛋白片段融合蛋白。SMN Tudor融合蛋白與p100 Tudor融合蛋白分別與HeLa細胞核裂解液中蛋白結(jié)合，并進行比較。 結(jié)果：PCR法獲得SMN Tudor基因序列，長度為183bp，成功構(gòu)建了表達載體pGEX的重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒pGEX-4T-SMN Tudor經(jīng)PCR鑒定，酶切鑒定和測序后在大腸桿菌BL21株中成功表達GST-SMN Tudor融合蛋白。通過比較可以看出p100 Tudor片段與SMN Tudor片段結(jié)合HeLa細胞核裂解液蛋白種類并不完全相同。 結(jié)論：構(gòu)建了表達載體pGEX-4T-SMN Tudor并表達出融合蛋白，，SMNTudor蛋白片段與p100 Tudor蛋白片段結(jié)合核蛋白種類不盡相同。本研究為下一步比較研究p100蛋白和SMN蛋白功能域片段功能奠定基礎(chǔ)。
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