【摘要】：研究60%乙醇提取的馬尾松花粉多糖組分D(PPM60-D)及其硫酸酯化物(SPPM60-D)對(duì)小鼠脾臟B淋巴細(xì)胞增殖、細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度([Ca2+]i)及抗體生成的影響。水煮醇沉法提取得到粗多糖,乙醇分級(jí)沉淀得到60%乙醇沉淀多糖PPM60,Sephacryl S-400HR分離純化得到多糖組分D,用氯磺酸 吡啶法對(duì)組分D進(jìn)行硫酸酯化,尼龍毛法分離B淋巴細(xì)胞,MTT法測(cè)定其增殖,熒光分光光度計(jì)測(cè)定B淋巴細(xì)胞[Ca2+]i,溶血空斑實(shí)驗(yàn)(PFC)和定量溶血分光光度(QHS)法測(cè)定B細(xì)胞抗體生成情況。結(jié)果顯示,SPPM60-D相對(duì)于PPM60-D能更顯著地提高B淋巴細(xì)胞的增殖以及[Ca2+]i(P0.01);經(jīng)TAK-242、LY294002、U73122、低分子肝素、維拉帕米和2-APB抑制劑作用后,均可抑制SPPM60-D和PPM60-D所致的[Ca2+]i升高(P0.05或P0.01);PFC和QHS檢測(cè)證實(shí),SPPM60-D對(duì)于促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的分化及抗體的生成有顯著作用,而PPM60-D的作用較弱。以上研究表明,PPM60-D經(jīng)過硫酸酯化改性后,活性明顯提高,推測(cè)SPPM60-D可與B淋巴細(xì)胞上TOLL樣受體4(TLR4)結(jié)合,通過TLR4-PI3K-PLC-IP3R信號(hào)通路使鈣庫釋放激活的鈣通道(CRAC)打開,從而使[Ca2+]i升高來激活B淋巴細(xì)胞,進(jìn)而提高其體外增殖和抗體生成能力。
[Abstract]:The effects of the extract of 60% ethanol on the proliferation of B-lymphocytes, the concentration of intracellular free calcium ([Ca2 +] i) and the antibody production were studied. the crude polysaccharide and the ethanol are separated and purified by the water-boiling alcohol precipitation method to obtain the polysaccharide component D, and the polysaccharide component D is obtained by the separation and purification of the Sephacryl S-400HR, the component D is subjected to sulfuric acid esterification by using the chlorosulfonic acid salt-removing method, the B-lymphocyte is separated by the nylon wool method, the proliferation of the B-lymphocyte and the MTT method is determined by the MTT method, The generation of B-cell antibody was determined by fluorescence spectrophotometer in the determination of B-lymphocyte[Ca 2 +] i, haemolytic plaque assay (PFC) and quantitative hemolysis (QHS). The results showed that SPP60-D could significantly increase the proliferation of B-lymphocytes and[Ca 2 +] i (P0.01). After the action of TAK-242, LY294002, U73122, low-molecular weight heparin, verapamil and 2-APB, the[Ca2 +] i induced by SPP60-D and PPM60-D could be inhibited (P0.05 or P0.01); and the detection of PFC and QHS confirmed that, SPPM60-D plays a significant role in promoting the differentiation of B-lymphocytes and the formation of antibodies, and the effect of PPM60-D is weak. The above research shows that the activity of PPM60-D is obviously improved after the esterification of sulfuric acid, and it is presumed that the SPPM60-D can be combined with the TOLL-like receptor 4 (TLR4) on the B-lymphocytes, and the calcium channel (CRAC) released by the calcium bank is opened by the TLR4-PI3K-PLC-IP3R signal path, so that the[Ca2 +] i is raised to activate the B-lymphocyte, So as to improve the in vitro proliferation and the antibody generation ability.
【作者單位】： 山東省動(dòng)物抗性生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：山東省自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號(hào):Y2008D13)資助的課題~~
【分類號(hào)】：R392

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7 張國英;RNA干擾對(duì)HepG2細(xì)胞AFP基因表達(dá)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2005年

8 王洋;堿性成纖維細(xì)胞生長因子及維生素C對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

9 嚴(yán)潤彬;胞外基質(zhì)對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響[D];重慶大學(xué);2005年

10 張琢;結(jié)核桿菌多肽抗原誘導(dǎo)了Balb/c 3T3成纖維細(xì)胞AQP1的表達(dá)[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2518568