【摘要】： 為了構(gòu)建一種廣譜的腫瘤疫苗，我們利用人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)通用腫瘤抗原構(gòu)建腫瘤疫苗。通過(guò)構(gòu)建的hTERT趨化抗原基因疫苗、基因修飾瘤苗以及與共刺激分子的聯(lián)合免疫途徑研究其抗腫瘤效應(yīng)和相關(guān)免疫機(jī)制。 我們利用抗原表位分析軟件分析人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶cDNA編碼的全長(zhǎng)蛋白序列，選取富含編碼多種CTL和Th識(shí)別相關(guān)肽的大片段基因序列進(jìn)行融合，組成新的抗原序列(簡(jiǎn)稱Te)。為了增強(qiáng)免疫效果分別在抗原基因的上游連接編碼CC亞族的趨化因子CCL21／SLC基因，在其下游連接IgG Fc基因片段，然后將整個(gè)融合片段插入到pcDNA3f表達(dá)質(zhì)粒中構(gòu)建趨化抗原DNA疫苗(pCCL21-Te-Fc)，同時(shí)建立該基因修飾的細(xì)胞瘤苗(B16／CCL21-Te-Fc)。RT-PCR和Western-Blotting分析表明，基因修飾瘤苗可以表達(dá)相應(yīng)的融合蛋白，且表達(dá)的融合蛋白能夠分泌到細(xì)胞外。體外淋巴細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)證明人源CCL21不僅可以趨化人外周血淋巴細(xì)胞對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞也具有很好的趨化活性，組織HE染色結(jié)果表明融合蛋白可以在體內(nèi)趨化小鼠淋巴細(xì)胞。在表達(dá)hTERT基因的小鼠黑色素瘤(B16／Te)模型中，腫瘤治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DNA疫苗pCCL21-Te-Fc免疫可顯著提高抗腫瘤免疫效果，但免疫小鼠在第52天全部死亡。而基因修飾瘤苗的腫瘤預(yù)防和治療實(shí)驗(yàn)分別有37.5％和25％的免疫小鼠得到長(zhǎng)期生存。 為了進(jìn)一步提高抗腫瘤效果我們將細(xì)胞瘤苗與anti-4-1BB聯(lián)合應(yīng)用，結(jié)果表明無(wú)論在皮下腫瘤模型還是在肺轉(zhuǎn)移模型中聯(lián)合免疫均可顯著提高抗腫瘤效果，，其中在小鼠皮下腫瘤模型中75％的免疫小鼠得到長(zhǎng)期生存。再攻擊實(shí)驗(yàn)未見腫瘤生長(zhǎng)，表明anti-4-1BB可以誘導(dǎo)較強(qiáng)的免疫記憶。免疫后淋巴細(xì)胞刪除實(shí)驗(yàn)證明在聯(lián)合免疫過(guò)程中CD8~+ T細(xì)胞發(fā)揮主要抗腫瘤作用，同時(shí)CD4~+ T細(xì)胞和NK細(xì)胞發(fā)揮部分作用。體外混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證明pCCL21-Te-Fc轉(zhuǎn)染的人PBMC能有效的誘導(dǎo)自身淋巴細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)hTERT的特異性CTL，對(duì)不同組織來(lái)源hTERT高表達(dá)的人腫瘤細(xì)胞系有殺傷效果，提示該疫苗具有廣譜抗腫瘤作用。
【圖文】：

圖2.連續(xù)PCR合成hTERT片段電泳示意圖M:oeneRu一erTM一oobpLadderPlus;一:37sbp片段;32lbp片段;3:245bp片段;4:169bp片段:5:97bp片段序列測(cè)序結(jié)果示意圖PCR合成378bphTERT片段序列測(cè)序示意圖洲飛八tCOS仁為了!舀日飛ZM仁井(J八，以喲，之卜不1，只口Mt份飛一d匕1’1砂執(zhí)、出切啟l仍2悶八:斗門!稱“口日甘~莎廣少扒日咐沁，尸d、3小AOJ今才返尸曉獷，·。，以于C比，廠丫形、2矛t11夕4。fL產(chǎn)從卜，衍…;、、;;_一八{(lán):、爪、已飛!，扣婦、、卜!!，一一只沛洲卜-

圖5.質(zhì)粒限制性內(nèi)切酶酶切驗(yàn)證圖譜pTe酶切圖譜。l:DNAmarkerloobpLadder;2:EeoRI尼coRV雙酶切質(zhì)粒pTepsTe酶切圖譜。l:DNAmarkerloobpLadder;2:EeoRI尼eoRV雙酶切質(zhì)粒psTepCCLZI一Te酶切圖譜。l:入DNA/HindlllMarker:2:EeoRI尼eoRV雙酶切質(zhì)粒pCC3:DNAmarker100bPLadder
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R730.5;R392

【共引文獻(xiàn)】

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1 劉壯;MDM2、p53基因及其蛋白質(zhì)與惡性腫瘤[J];白血病.淋巴瘤;2003年06期

2 巴艷華;李惠平;;鼠雙微粒體2/p53通路與乳腺癌的研究進(jìn)展[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年05期

3 翁羽蕙;張鈾;;MUC1的研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2010年10期

4 姜濤;徐闖;劉國(guó)文;羅勝軍;高英杰;王哲;;樹突狀細(xì)胞抗腫瘤疫苗研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年02期

5 伊煥發(fā),伊煥忻;樹突狀細(xì)胞疫苗的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊(cè));2003年06期

6 朱旬,武正炎;樹突狀細(xì)胞體內(nèi)遷移在腫瘤免疫治療中的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊(cè));2005年10期

7 秦艷茹;金寒;王立東;何欣;范宗民;焦新英;高珊珊;李吉林;劉賓;張延瑞;馮常煒;;食管癌前病變和癌組織中p15、p16、mdm2和p53蛋白的表達(dá)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年01期

8 張巧;錢麗麗;劉紅梅;趙國(guó)強(qiáng);宮亞歐;丁蘭萍;楊勝利;;pcDNA3.1-hTERT真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其抗腫瘤效應(yīng)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年03期

9 范健;張華林;譚春燕;蔣宇揚(yáng);;以腫瘤凋亡相關(guān)蛋白和基因?yàn)榘械男》肿覽J];化學(xué)進(jìn)展;2007年12期

10 耿建;陳龍邦;;靶向人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶T細(xì)胞表位肽的治療性癌癥疫苗研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2009年11期

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1 李健;陳元;;樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤免疫治療新近展[A];第二屆湖北省腫瘤靶向治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文選[C];2007年

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1 馬潔;mGITRL 基因重組腺病毒轉(zhuǎn)染DC增強(qiáng)Lewis肺癌移植瘤小鼠抗瘤免疫的實(shí)驗(yàn)研究[D];江蘇大學(xué);2010年

2 劉壯;癌基因MDM2和抑癌基因P53的表達(dá)與兒童非何杰金淋巴瘤關(guān)系的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2002年

3 曲建慧;肝癌細(xì)胞中腫瘤基因P53/MDM2/P21與HBV關(guān)系的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

4 陳玉丙;樹突狀細(xì)胞抗原負(fù)載及MAGE-3 DNA瘤苗研制[D];吉林大學(xué);2004年

5 葉楓;VEGF對(duì)CD34～+造血干/祖細(xì)胞來(lái)源的樹突狀細(xì)胞分化和功能的影響及其在卵巢癌免疫中的作用和相關(guān)機(jī)制[D];浙江大學(xué);2005年

6 潘進(jìn)勇;MUC1模擬表位肽疫苗預(yù)防和治療膀胱癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

7 歐陽(yáng)玲;外陰鱗狀細(xì)胞癌遺傳變異與HPV感染狀態(tài)的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2005年

8 王迷娟;（一）基于p53-mdm2復(fù)合物結(jié)構(gòu)的mdm2小分子阻斷劑的設(shè)計(jì)、合成和生物學(xué)活性評(píng)價(jià) （二）過(guò)碘酸鈉去硅醚保護(hù)基方法及機(jī)理的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

9 蔡永國(guó);肝素酶基因修飾的樹突狀細(xì)胞疫苗對(duì)胃癌細(xì)胞的免疫效應(yīng)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 朱智彤;小分子多肽抗實(shí)驗(yàn)性肝癌及其機(jī)制的初步研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

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1 李玉琴;幽門螺桿菌、MDM2SNP309基因多態(tài)性的交互作用與胃癌易感性的相關(guān)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

2 周亮;MDM2和p21~（WAF1）在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及相關(guān)性分析[D];鄭州大學(xué);2010年

3 劉沛;p63、p15和mdm2蛋白在人口腔扁平苔蘚和口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2010年

4 付東宏;E2F-1、PCNA、MDM2和p53在河南省林州市食管鱗癌中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2010年

5 郭真理;子宮內(nèi)膜樣腺癌中MDM2、Livin和Caspase-3蛋白和mRNA的表達(dá)及意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

6 唐勁;胃腸道間質(zhì)瘤中Pokemon和P14-ARF的表達(dá)及臨床意義[D];中南大學(xué);2011年

7 劉靈;PRMT2及其剪接體對(duì)雌激素受體β轉(zhuǎn)錄活性的影響[D];南華大學(xué);2011年

8 杜紅禹;胃腺癌中TSG101與MDM2蛋白的表達(dá)及其意義[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2011年

9 王琳;p53和mdm2蛋白在單純腸上皮化生、不典型腸上皮化生中的表達(dá)及與胃癌關(guān)系的病理研究[D];山東大學(xué);2011年

10 匡剛;PBDE-47致SH-SY5Y細(xì)胞凋亡中p53作用及其活化機(jī)制探討[D];華中科技大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2518086