【摘要】：背景:脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞具有自我更新能力且在體外特定條件下具有多向分化潛能,在臨床上具有廣泛的應(yīng)用前景。然而,脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)仍存在諸多困難與不足。目的:體外分離培養(yǎng)獲得兔脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞,對(duì)其形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性進(jìn)行觀察,并鑒定其向成骨、成脂分化的潛能。方法:切取兔頸背區(qū)皮下脂肪,用膠原酶消化法分離兔脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞,進(jìn)行體外培養(yǎng),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。第4代兔脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞向成脂、成骨誘導(dǎo)分化后進(jìn)行油紅O染色、茜素紅染色、堿性磷酸酶染色,觀察其成脂、成骨分化潛能。結(jié)果與結(jié)論:兔脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形漩渦樣貼壁生長(zhǎng),能穩(wěn)定傳代至第10代,增殖能力強(qiáng);流式細(xì)胞儀檢測(cè)可高表達(dá)CD29、CD90及CD44,而CD34和CD45表達(dá)較低;成脂誘導(dǎo)后的兔脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞油紅O染色呈陽性;成骨誘導(dǎo)后的兔脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞堿性磷酸酶和茜素紅染色均呈陽性,以上結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)成功分離培養(yǎng)出兔脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞,獲得的細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定,增殖活躍,高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原以及具有向成骨、成脂等多向分化的潛能,有望為骨組織工程提供理想的種子細(xì)胞。
[Abstract]:Background: adipose derived mesenchymal stem cells have the ability of self-renewal and multidirectional differentiation potential under specific conditions in vitro, and have a wide range of clinical application prospects. However, there are still many difficulties and shortcomings in the isolation and culture of adipose-derived mesenchymal stem cells. Aim: rabbit adipose derived mesenchymal stem cells were isolated and cultured in vitro, their morphology and biological characteristics were observed, and their potential for osteogenic and adipogenic differentiation was identified. Methods: rabbit adipose cells were isolated from rabbit cervical dorsal region by collagenase digestion and cultured in vitro. Cell surface markers were detected by flow cytometry, cell activity was detected by CCK-8 assay and cell growth curve was drawn. The fourth generation of rabbit adipose-derived mesenchymal stem cells were adipogenic. After osteogenic differentiation, oil red O staining, alizalin red staining and alkaline phosphatase staining were performed to observe the adipogenesis and osteogenic differentiation potential of rabbit adipose-derived mesenchymal stem cells. Results and conclusion: rabbit adipose derived mesenchymal stem cells grew like long fusiform whirlpool adherent, which could stably pass to the 10th generation, and the proliferation ability was strong. Flow cytometry detected high expression of CD29,CD90 and CD44, but low expression of CD34 and CD45. Oil red O staining of rabbit adipose derived mesenchymal stem cells induced by fat was positive. The alkaline phosphatase and alizalin red staining of rabbit adipose-derived mesenchymal stem cells were positive after osteogenic induction. The above results showed that rabbit adipose-derived mesenchymal stem cells were successfully isolated and cultured. The obtained cells were stable in growth, active in proliferation, highly expressed in the surface antigen of mesenchymal stem cells and had the potential to differentiate into osteogenesis, adipogenesis and other multidirectional differentiation, which is expected to provide ideal seed cells for bone tissue engineering.
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院骨科;上海市第一人民醫(yī)院寶山分院骨科;復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院青浦分院骨科;
【基金】：上海市衛(wèi)計(jì)委資助項(xiàng)目(2010135)~~
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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2 蘇曉華;牛胎肝間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2011年

3 鄧長(zhǎng)卿;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及功能研究[D];蘇州大學(xué);2011年

4 楊晨;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離鑒定[D];吉林大學(xué);2013年

5 馬云鵬;應(yīng)用大塊平鋪法對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離、傳代、凍存及復(fù)蘇的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

6 那仁格日勒;溶血磷脂酸抑制人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)理[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

7 王黎明;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分泌蛋白表達(dá)譜研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

8 唐秋靈;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向男性生殖細(xì)胞分化的研究[D];汕頭大學(xué);2008年

9 徐小霞;人胎盤絨毛層間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)的優(yōu)化及生物學(xué)特性的初步分析[D];蘇州大學(xué);2009年

10 王建軍;成人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng)及成骨潛能的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：2507970