【摘要】： 瘧疾是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病。腦型瘧疾(CM)是惡性瘧疾的癥狀之一，也是最主要的致死原因。CM的病理基礎(chǔ)是紅內(nèi)期晚期滋養(yǎng)體和裂殖體感染的紅細(xì)胞與宿主內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附。CM所涉及到的多因素和不同機(jī)制迄今尚未闡明。 前期文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，Clag9蛋白是感染紅細(xì)胞與人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HBMVEC)發(fā)生黏附的關(guān)鍵蛋白。本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)通過(guò)生物信息學(xué)軟件對(duì)Clag9進(jìn)行抗原性和表面可能性分析，選取了Clag9的三個(gè)片段Cg1，Cg2，和Cg3，利用原核表達(dá)三種多肽片段的GST融合蛋白，檢測(cè)三種蛋白影響HBMVEC關(guān)鍵的黏附相關(guān)受體細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)表達(dá)的情況，以蛋白中檢測(cè)的對(duì)應(yīng)內(nèi)毒素劑量做為對(duì)照，結(jié)果表明，Cg3能夠上調(diào)宿主細(xì)胞受體ICAM-1的表達(dá)。但Cg1和Cg2沒(méi)有類(lèi)似作用。 由于內(nèi)毒素具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)ICAM-1表達(dá)的作用，為了更加明確Clag三個(gè)片段對(duì)于血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附功能的影響，必須去除蛋白中的內(nèi)毒素。本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)策略是：通過(guò)構(gòu)建真核表達(dá)載體，，利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)上述三種Clag9片段或用去除原核表達(dá)蛋白中內(nèi)毒素的方法獲得內(nèi)毒素含量不影響血管內(nèi)皮細(xì)胞表面ICAM-1表達(dá)的Clag9片段；用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)做為檢測(cè)蛋白黏附功能的前期實(shí)驗(yàn)的靜態(tài)模型，在體外將蛋白與HUVEC共同孵育，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)宿主細(xì)胞表面ICAM-1表達(dá)的情況。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：去除內(nèi)毒素后的Cg3與對(duì)照組同等劑量的GST對(duì)HUVEC的作用結(jié)果無(wú)顯著差異，表明Cg3無(wú)明顯上調(diào)宿主細(xì)胞受體ICAM-1表達(dá)的作用，結(jié)合近期Clag9功能研究的相關(guān)文獻(xiàn)，Clag9在參與瘧原蟲(chóng)感染紅細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附方面的功能可能并非通過(guò)直接作用于宿主黏附受體而實(shí)現(xiàn)，而是通過(guò)參與惡性瘧感染紅細(xì)胞表面黏附分子的轉(zhuǎn)運(yùn)，其功能有待于進(jìn)一步研究。
[Abstract]:Malaria is a disease that seriously endangers human health. Cerebral malaria (CM) is one of the symptoms of falciparum malaria and the most important cause of death. The pathological basis of CM is the adhesion between erythrocytes and host endothelial cells infected with trophozoites and merozoites in the late erythrocytic phase. The multiple factors and different mechanisms involved in CM have not yet been clarified. It was found that Clag9 protein was the key protein for the adhesion of infected red blood cells to human microvascular endothelial cells (HBMVEC). In our laboratory, the antigenicity and surface possibility of Clag9 were analyzed by bioinformatics software. Three fragments of Clag9, Cg1,Cg2, and Cg3, were selected to express three polypeptide fragments in prokaryotic GST fusion proteins. The effects of three proteins on the expression of HBMVEC key adhesion related receptor cell adhesion molecule-1 (ICAM-1) were detected. The results showed that the corresponding endotoxin dose detected in the protein was used as control. Cg3 can up-regulate the expression of host cell receptor ICAM-1. But Cg1 and Cg2 have no similar effect. Because endotoxin can induce the expression of ICAM-1, in order to clarify the effect of three fragments of Clag on the adhesion function of vascular endothelial cells, it is necessary to remove endotoxin from the protein. The strategy of this experiment is to construct eukaryotic expression vector to express the above three Clag9 fragments by mammal cells or to obtain Clag9 fragments whose endotoxin content does not affect the expression of ICAM-1 on the surface of vascular endothelial cells by removing endotoxin from prokaryotic expression proteins. Human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) was used as a static model to detect protein adhesion function. The protein was incubated with HUVEC in vitro, and the expression of ICAM-1 on the surface of host cells was detected by flow cytometry. The results showed that the effect of Cg3 on HUVEC was not significantly different from that of the control group, indicating that Cg3 did not up-regulate the expression of host cell receptor ICAM-1. Combined with the recent research on Clag9 function, the function of Clag9 in the adhesion of red blood cells to vascular endothelial cells infected with Plasmodium falciparum may not be realized by directly acting on the host adhesion receptor. However, by participating in the transport of erythrocyte adhesion molecules in falciparum malaria infection, its function needs to be further studied.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R382

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本文編號(hào)：2498726