【摘要】：嚴(yán)重急性呼吸綜合征(severe acute respiratory syndrome,SARS),是一種新出現(xiàn)的傳染性疾病。由于本病傳播速度快,人群普遍易感和死亡率較高,迄今還沒有有效的藥物和疫苗,目前仍未消除SARS會(huì)對人類的健康構(gòu)成的嚴(yán)重威脅,因此加強(qiáng)SARS防治的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究對保障人類的健康和生命安全具有重要意義。 SARS的病原體是一種新的冠狀病毒,命名為SARS冠狀病毒(SARS Coronavirus SARS CoV)。該病毒屬正鏈RNA病毒,基因組全長約為30kb,與經(jīng)典冠狀病毒僅有約60%同源性,但基因組的組織形式與其它冠狀病毒相似。其基因組5′端約三分之二的區(qū)域是編碼病毒RNA聚合酶復(fù)合蛋白,而后三分之一的區(qū)域?yàn)榫幋a病毒結(jié)構(gòu)蛋白,按基因組上的排列順序依次為刺突蛋白(S)、表面蛋白(E)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)。 S蛋白插在病毒的胞膜上,構(gòu)成了病毒表面的主要暴露蛋白,形成突起,突起排列間隔較寬。S蛋白為非共價(jià)鍵結(jié)合二聚體,是Ⅰ型膜糖蛋白,也是結(jié)構(gòu)蛋白中最大的蛋白,形態(tài)學(xué)上為鼓錘狀。S蛋白有4個(gè)結(jié)構(gòu)域:一個(gè)短的C末端構(gòu)成胞質(zhì)區(qū);一個(gè)跨膜區(qū)和兩個(gè)胞膜外域(分別稱為S1和S2)。S蛋白具有多方面的功能,負(fù)責(zé)結(jié)合敏感細(xì)胞受體、誘導(dǎo)病毒胞膜和細(xì)胞膜以及細(xì)胞之間的融合、刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體和介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答。 目前,病毒免疫學(xué)研究比較公認(rèn)的觀點(diǎn)是,保護(hù)性抗體可以中和病毒,使病毒從體內(nèi)得到清除。SARS-CoV在SARS自愈患者的血清中生長緩慢,說明人體可以產(chǎn)生針對病毒的抗體,這為研制有效的SARS疫苗提供依據(jù)。S蛋白是冠狀病毒中最主要的抗原,此蛋白在病毒的入侵、中和抗體的產(chǎn)生方面起著非常關(guān)鍵的作用。對最近報(bào)道的多株SARS-CoV S蛋白突變位點(diǎn)的分析表明,該蛋白序列上有3個(gè)點(diǎn)突變即G77D,1224T,S577A位于S1區(qū)段。S2基因較為保守,位于M Helix附近,含有3個(gè)呈均勻分布的N連接糖基化位點(diǎn),可能在S蛋白的免疫原性中起重要作用。因此,本研究選擇了SARS-CoV(香港株)的全長S蛋白及其亞單位S1和S2作為SARS疫苗的候選抗原。 突起蛋白含有豐富的半胱氨酸,形成15對二硫鍵。研究表明針對S蛋白的中和性抗體多數(shù)是識(shí)別構(gòu)象表位。因此,采用真核分泌表達(dá)有利于制備接近天然
[Abstract]:Severe acute respiratory syndrome (severe acute respiratory syndrome,SARS) is a new infectious disease. Due to the rapid spread of the disease and the high prevalence and mortality of the population, there are no effective drugs and vaccines to date, and the serious threat posed by SARS to human health has not yet been eliminated. Therefore, it is of great significance to strengthen the basic and applied research of SARS prevention and treatment to ensure human health and life safety. The pathogen of SARS is a new coronavirus, named SARS coronavirus (SARS Coronavirus SARS CoV). The virus belongs to positive chain RNA virus, and its genome length is about 30kb. it has only about 60% homology with classical coronavirus, but the tissue form of genome is similar to that of other coronavirus. About 2/3 of the 5 'end of the genome encodes the viral RNA polymerase complex protein, and then 1/3 encodes the viral structural protein, followed by the spiny protein (S), surface protein (E), in the order of the genome. Membrane protein (M) and nuclear protein (N). S protein is inserted on the cell membrane of the virus, forming the main exposed protein on the surface of the virus, forming protrusions, and the process arrangement interval is wide. S protein is a non-covalent bond binding dimer, is a type I membrane glycoprotein, and is also the largest protein in the structural protein. Morphologically, the S protein has four domains: a short C-terminal constitutes the cytoplasmic region; One transmembrane region and two outer domains of cell membrane (called S1 and S2, respectively). S protein has many functions and is responsible for binding sensitive cell receptors to induce fusion between viral cell membrane and cell membrane, as well as between cells. Stimulate the production of neutralizing antibodies and mediate cellular immune responses. At present, it is recognized in the study of viral immunology that protective antibodies can neutralize the virus and remove the virus from the body. SARS-CoV grows slowly in the serum of patients with SARS self-healing, indicating that the human body can produce antibodies against the virus. This provides a basis for the development of an effective SARS vaccine. S protein is the most important antigen in coronavirus, which plays a very key role in virus invasion and neutralizing antibody production. The analysis of the recently reported mutation sites of SARS-CoV S protein showed that there were three point mutations in the protein sequence, namely G77D, 1224T, S577A located in S1 region. S2 gene was conserved and located near M Helix. There are three uniformly distributed N-linked glycosylation sites, which may play an important role in the immunogenicity of S protein. Therefore, the full-length S protein and its subunits S1 and S2 of SARS-CoV (Hong Kong strain) were selected as candidate antigens for SARS vaccine. The protruding protein is rich in cysteine and forms 15 pairs of disulfide bonds. Studies have shown that most of the neutralizing antibodies against S protein recognize conformational epitopes. Therefore, the use of eukaryotic secretory expression is beneficial to the preparation of close to natural.
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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1 劉曉平;李寶金;張超;;HSV-tk基因治療靶向載體的構(gòu)建及特異性表達(dá)分析[J];癌癥;2006年02期

2 仲飛,李秀錦,王辛中,劉維全,齊順章;腺病毒介導(dǎo)的豬生長激素cDNA在大鼠體內(nèi)的誘導(dǎo)表達(dá)及其促生長作用的研究[J];病毒學(xué)報(bào);2003年02期

3 曹永寬,莫永炎,田伏洲,鄧鵬,秦清和,邢飛躍,李紅樂,姜勇;人AWP1-RFP融合基因重組腺病毒的快速構(gòu)建及其鑒定[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

4 戴觀榮,崔龍,高軍,王元和;含CD基因的腺病毒載體制備及體外抑瘤效果觀察[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年01期

5 金吳東,陳龍華,穆峰;大腸桿菌內(nèi)同源重組法構(gòu)建含mIκBα基因的重組腺病毒及其在Hep G2細(xì)胞中的表達(dá)[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年03期

6 ;Killing effects of cytosine deaminase gene mediated by adenovirus vector on human pancreatic cancer cell lines in vitro[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2003年01期

7 邢毅飛,魯功成;HSV-TK/GCV系統(tǒng)及其與前列腺癌基因治療[J];國外醫(yī)學(xué).泌尿系統(tǒng)分冊;2000年S1期

8 胡朝全,孫誠誼,孫連生,王玉芝;重組腺病毒載體含人抑瘤素的擴(kuò)增及純化[J];貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年01期

9 胡朝全,孫誠誼,孫連生,王玉芝;質(zhì)粒DNA同源重組法構(gòu)建腺病毒載體hosm[J];貴州醫(yī)藥;2004年01期

10 高軍,崔龍,龍建秋,谷愛梅,李茂,戴觀榮,潘衛(wèi),曹廣文;腺病毒載體介導(dǎo)的CD自殺基因體外抑瘤效果觀察[J];海軍醫(yī)學(xué)雜志;2000年03期

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1 張春紅;黃忠;阮良基;曹漢威;;含豬生長激素基因的重組腺病毒的構(gòu)建[A];第一屆中國養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

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2 陳亮;胰島素樣生長因子1增強(qiáng)骨形態(tài)形成蛋白9介導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化及成骨作用的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

3 郝春秋;HCV結(jié)構(gòu)蛋白腺病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及T細(xì)胞疫苗對HCV清除作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

4 高天君;重組腺病毒載體Ad-BDNF的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)染嗅鞘細(xì)胞移植修復(fù)脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

5 倪之嘉;復(fù)制缺陷型重組腺病毒介導(dǎo)人內(nèi)皮細(xì)胞抑制素基因治療結(jié)腸癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

6 程大勝;表皮細(xì)胞培養(yǎng)中維持干細(xì)胞特性相關(guān)技術(shù)的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

7 薛緒潮;攜帶白細(xì)胞介素-12基因的增殖型腺病毒治療胃癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

8 孫學(xué)剛;LPS受體介導(dǎo)的細(xì)胞激活的信號(hào)機(jī)制研究[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

9 張陽;人血管生成抑制因子METH1重組腺病毒載體的制備及其對兔耳增生性瘢痕影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 賈俊;重組腺病毒體外轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞的研究[D];武漢大學(xué);2004年

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2 張丹;流感病毒H5/H3亞型重組腺病毒疫苗構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2011年

3 吳清華;TGF-β3基因轉(zhuǎn)染MSCs復(fù)合殼聚糖的組織工程支架構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

4 劉欣欣;膠原凝膠及殼聚糖基因載體的制備[D];長春理工大學(xué);2011年

5 仲凱勵(lì);B細(xì)胞淋巴瘤獨(dú)特型DNA疫苗誘導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

6 王維鋒;腺病毒介導(dǎo)的siRNA抑制hTERT增強(qiáng)肝癌化療敏感性的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

7 張彩紅;輪狀病毒基因工程疫苗免疫效果的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

8 徐丁堯;肝癌靶向性復(fù)制缺陷型腺病毒的構(gòu)建及其作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

9 張忠榮;hOPG基因治療大鼠絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 劉志榮;腺病毒介導(dǎo)nm23-H1轉(zhuǎn)染對人肺腺癌細(xì)胞增殖及集落形成的影響[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

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本文編號(hào)：2493045