【摘要】： 彎曲菌(Campylobacter)是一種重要的食源性人獸共患病原菌,是全球范圍內(nèi)引起人胃腸道感染的最常見的病原菌之一,特定血清型空腸彎曲菌引起的腸炎是誘發(fā)格林-巴利綜合癥(GBS)的重要前驅(qū)感染因子。彎曲菌作為許多畜禽的寄生菌在自然界廣泛存在,人常因食入被彎曲菌污染的食品等而感染。此外,由于彎曲菌耐藥性的不斷出現(xiàn),食品安全和食源性疾病的問題已日益突出,成為公共衛(wèi)生關注的新焦點。本研究的目的是:(1)對醫(yī)院腹瀉人群、牛群彎曲菌的感染流行狀況進行初步調(diào)查研究;(2)應用國標方法鑒定分離株的生化特性,并應用2005年美國臨床實驗室標準化研究所(CLSI)推薦使用的瓊脂擴散法進行耐藥分析;(3)采用PCR-RFLP亞分型方法追溯不同來源的空腸彎曲菌間的相互關系。 一、空腸彎曲菌和結腸彎曲菌的流行病學調(diào)查 在2005年7月-2006年12月間,采集揚州市區(qū)三所醫(yī)院門診部和住院部的腹瀉人群的糞便樣品2,962份和江蘇省10個奶牛場的產(chǎn)奶牛、育成牛、飼養(yǎng)環(huán)境樣品1,531份,以國標方法為參照,采用增菌培養(yǎng)、選擇性培養(yǎng)和多重PCR鑒定方法對上述樣品進行空腸彎曲菌和結腸彎曲菌的分離鑒定。結果顯示,在2,962份醫(yī)院糞便樣品中,143份空腸彎曲菌陽性,平均陽性率4.83%,10份結腸彎曲菌陽性,平均陽性率0.34%。統(tǒng)計分析表明,不同醫(yī)院間感染率差異不顯著(p0.05),門診部感染率極顯著高于住院部(p0.01),7歲以下幼兒感染率極顯著高于其它年齡段人群(p0.01),6月-8月感染率顯著高于12月-2月和3月-5月份的感染率(p0.05)。在1,531份牛場樣品中,119份空腸彎曲菌陽性,平均陽性率7.77%;3份結腸彎曲菌陽性,平均陽性率0.20%;空腸彎曲菌、結腸彎曲菌陽性率最高分別為30.91%、3.57%。在三類樣品中,產(chǎn)奶牛空腸彎曲菌、結腸彎曲菌的平均陽性率分別為5.02%、0.32%,育成�？漳c彎曲菌的平均陽性率為8.70%、未檢出結腸彎曲菌,環(huán)境樣品空腸彎曲菌、結腸彎曲菌的平均陽性率分別為10.28%、0.18%。上述結果顯示,空腸彎曲菌和結腸彎曲菌在腹瀉人群和奶牛群體的流行呈現(xiàn)多樣化和復雜化,牛群的感染率高于人群,應加強牛群彎曲菌的控制,將有助于控制彎曲菌的感染和傳播。 二、人源和牛源彎曲菌分離株的生化特性與耐藥性分析 采用國標方法和2005年美國臨床實驗室標準化研究所(CLSI)推薦使用的瓊脂擴散法對93株人源空腸彎曲菌、35株牛源空腸彎曲菌,以及13株結腸彎曲菌的生化特性和耐藥性進行了研究。 生化實驗結果顯示,128株空腸彎曲菌和13株結腸彎曲菌的氧化酶實驗均呈陽性,128株空腸彎曲菌的馬尿酸鈉水解實驗呈陽性,13株結腸彎曲菌的馬尿酸鈉水解實驗呈陰性,結果表明所有的分離株均為彎曲菌,且本研究所分離的空腸彎曲菌在實驗室培養(yǎng)條件下沒有失去分解馬尿酸鹽的能力。 藥敏實驗結果顯示,93株人源空腸彎曲菌對8大類21種抗生素高度敏感的是:慶大霉素91.40%、阿齊紅霉素89.25%、紅霉素88.46%、阿莫西林87.10%、鏈霉素83.87%、頭孢噻肟81.72%、卡那霉素81.72%,高度耐藥的是:頭孢哌酮100%、復方新諾明100%、頭孢拉定97.85%、頭孢克羅93.55%、環(huán)丙沙星91.40%、萘啶酸91.40%、左旋氧氟沙星88.17%、土霉素87.50%。耐藥菌株的耐藥譜主要集中在9耐至14耐,達81.71%,兩醫(yī)院分離株多重耐藥性無顯著性差異(p0.05),不同診區(qū)分離株的多重耐藥性間存在顯著性差異(p0.05)。 35株牛源空腸彎曲菌對抗生素高度敏感的是:阿莫西林100%、阿齊紅霉100%、鏈霉素97.14%、慶大霉素94.29%、紅霉素91.43%、頭孢噻肟82.86%、克林霉素82.86%;高度耐藥的是:頭孢哌酮100%、恩諾沙星100%、環(huán)丙沙星97.14%、復方新諾明97.14%、左旋氧氟沙星94.29%、萘啶酸94.29%、頭孢拉定94.29%、諾氟沙星91.43%、頭孢克羅88.57%。菌株耐藥譜顯示,35株分離株的耐藥主要集中在9耐到12耐,占88.57%,產(chǎn)奶牛分離株的多重耐藥性較其它來源的分離株的耐藥性更嚴重。 13株結腸彎曲菌對臨床常用的抗生素高度敏感的是:頭孢噻肟100.00%、阿莫西林92.31%、紅霉素92.31%、阿齊紅霉素92.31%、克林霉素84.62%,高度耐藥的是:頭孢拉定100%、頭孢哌酮100%、諾氟沙星100%、恩諾沙星100%、環(huán)丙沙星100%、左旋氧氟沙星100%、萘定酮酸100%、復方新諾明100%、四環(huán)素100%、頭孢克羅92.31%、強力霉素92.31%、土霉素88.89%。耐藥菌株的耐藥譜主要分布在16耐、15耐、13耐和11耐,占76.91%。與空腸彎曲菌的耐藥譜相比,結腸彎曲菌的多重耐藥性較為嚴重。 人源和牛源的分離株對頭孢菌素類、喹諾酮類和磺胺類抗生素均產(chǎn)生了很強的耐藥性,此外,人源分離株還對四環(huán)素類抗生素產(chǎn)生了較強的耐藥性,而且多重耐藥的現(xiàn)象很嚴重,92.2%的菌株在9耐以上,更值得人們注意的是,通過對臨床用藥的分析,彎曲菌的耐藥性并非是完全在治療彎曲菌病的過程中產(chǎn)生的,主要是在用抗生素防止和治療其它各種感染的過程中產(chǎn)生的,彎曲菌的耐藥性多屬于被動耐藥。因此在抗生素的使用過程中,要注意交叉用藥,防止多重耐藥菌株的產(chǎn)生。同時,還必須嚴格控制各種耐藥微生物到處傳播,以防多重耐藥性病原菌的交叉?zhèn)鬟f。 我國人源和牛源空腸彎曲菌、結腸彎曲菌的耐藥狀況呈現(xiàn)多樣化和復雜化,必須加強各地彎曲菌耐藥性和抗生素使用情況的監(jiān)測,及時調(diào)整用藥方案和公共衛(wèi)生策略。三、空腸彎曲菌FlaA基因RFLP分子亞分型方法的建立與應用根據(jù)文獻合成引物,PCR擴增目的片段,限制性內(nèi)切酶DdeⅠ進行酶切,建立PCR-RFLP亞分型方法,重復性實驗表明該方法具有良好的分型能力,是一種快速、簡便、辨別力強、重復性好的分子亞分型方法,可作為研究空腸彎曲菌來源和傳播途徑的有力工具。應用該分型方法對329株不同來源的空腸彎曲菌進行分析,277株菌株得到了有效分型,可分型率為84.19%。通過對獲得的圖譜進行比對,將菌株分成了20個不同的RFLP譜型,優(yōu)勢譜型有2、5、6、7、9、11、12、15、16、18、20,占82.67%。其中,170株雞群分離的空腸彎曲菌被分布在20個不同的譜型中,70株人源分離的菌株被分為19個不同的基因譜型,25株牛源空腸彎曲菌被分為13個不同的譜型,12株市場分離的菌株被分為6個基因型別。在人源的9個主要型別中,有8個分別與其它三種來源菌株的主要型別相互重疊。人源分離株的型別與雞源、牛源以及市場禽肉分離株的型別呈交叉分布,表明牛、雞是人類感染空腸彎曲菌的主要傳染源之一,為研究空腸彎曲菌的種內(nèi)差異和致病力差異奠定了基礎。上述結果顯示本文建立的空腸彎曲菌PCR-RFLP亞分型方法,對空腸彎曲菌感染源追蹤有重要應用價值。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R378

【引證文獻】

相關期刊論文 前1條

1 邢麗萍;薛永春;楊月清;;空腸彎曲菌分型技術的研究進展[J];公共衛(wèi)生與預防醫(yī)學;2012年06期

，

本文編號：2461053