【摘要】： 獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)絕大多數(shù)是由人類免疫缺陷病毒I型(HIV-1)引起的全球流行的傳染病,并成為人類主要的致死性疾病之一。據(jù)聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署和世界衛(wèi)生組織公布的《2006年世界艾滋病報告》估計,自1981年首次發(fā)現(xiàn)HIV-1感染者以來,2006年全球感染人數(shù)已達3950萬人,新增430萬名患者。全球每天有1.1萬人感染HIV,同時每天有8000名感染者死亡。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(HAART)雖能降低部分患者病毒含量,重建部分免疫功能,延緩病情發(fā)展,改善癥狀,但因藥物副作用而使許多患者難以耐受,依從差,更為重要的是HAART不能完全清除病毒。所以尋找有效HIV-1疫苗是目前迫切需要解決的問題。大量研究證明細胞免疫特別是HIV-1特異性CTL應(yīng)答反應(yīng)在控制HIV-1感染中起關(guān)鍵作用,故研發(fā)以誘導(dǎo)HIV-1特異性CTL應(yīng)答為目的的疫苗意義重大。開發(fā)此類疫苗首先要確定能誘導(dǎo)強的HIV-1特異性CTL應(yīng)答并具有廣泛免疫原性的特異性表位。有效的HIV-1特異性CTL應(yīng)答不僅由抗原結(jié)構(gòu)決定,同時受HLA-I等位基因限制,因此在篩選和鑒定具有強的和廣泛作用的HIV-1特異性CTL表位時,研究表位的HLA-錯誤!未找到引用源。類分子的限制性是不可缺少的工作。不同人群HLA-錯誤!未找到引用源。等位基因分布頻率不同,決定了不同人群HIV-1的CTL應(yīng)答模式不同,所以在不同人群篩選可用于研制疫苗的表位非常必要。中國作為世界人口最多的國家,存在許多潛在的HIV-1蔓延危險因素,2006年底統(tǒng)計估計已有65萬人感染HIV-1,開發(fā)有效疫苗是控制HIV-1感染的最佳途徑。中國人群常見HLA-錯誤!未找到引用源。等位基因分布頻率不同于白種人群,HIV-1病毒主要流行株與國外也存在差異,這就決定了中國人群對HIV-1的CTL應(yīng)答模式不同于白種人及黑人。故篩選出中國人群常見等位基因限制的HIV-1特異性CTL表位將對研發(fā)針對中國人群誘導(dǎo)特異性CTL應(yīng)答的HIV-1疫苗具有重要的現(xiàn)實意義。 HIV-1B亞型是中國的主要流行亞型,同時HIV-1B亞型誘導(dǎo)的特異性CTL應(yīng)答具有交叉性,因此,本研究選擇HIV-1B亞型感染者為研究對象,用ELISpot法檢測覆蓋HIV-1B全基因序列肽庫誘導(dǎo)的CTL應(yīng)答反應(yīng),分析中國人群HIV-1B感染者HIV-1特異性CTL應(yīng)答特征,確定免疫優(yōu)勢應(yīng)答區(qū)域。通過對病毒基因和多肽序列進行分析,進一步篩選出具有保守性的免疫優(yōu)勢區(qū)域,結(jié)合對患者HLA-錯誤!未找到引用源。基因分型,選擇攜帶中國人群常見等位基因并對該區(qū)域應(yīng)答的患者,結(jié)合數(shù)據(jù)庫中已確定的表位,對這些區(qū)域中常見等位基因限制的表位進一步確證,從而篩選出可用于研發(fā)針對中國人群的HIV-1疫苗所需表位。 主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下: 1.采用多重套式PCR方法擴增Gag基因,根據(jù)結(jié)果確定12例HIV-1B感染者。結(jié)合以前分型結(jié)果,共選擇66例感染者為研究對象,用PCR-SSP(系列特異性引物)技術(shù)鑒定HLA-I型等位基因分型,發(fā)現(xiàn)研究人群8個HLA-錯誤!未找到引用源。類基因型A*02,A*24,A*11,B*13,Cw*03,Cw*07,Cw*01,Cw*06分布頻率大于10%,與以前的結(jié)果一致,基因型B*15,B*40略低于大規(guī)模調(diào)查結(jié)果,提示本研究人群能較好的代表中國人群。 2.用ELISpot法檢測HIV-1B感染者覆蓋HIV-1B全基因共享序列肽庫誘導(dǎo)的CTL應(yīng)答反應(yīng),共發(fā)現(xiàn)14個免疫優(yōu)勢區(qū),分布在Gag、Pol、Env、Nef蛋白區(qū),其中6個位于Gag區(qū), 1個位于Pol區(qū), 3個位于Env區(qū),4個位于Nef區(qū),與白種人群和非洲人群觀察的結(jié)果相似,但從每個蛋白的具體肽段分析,則存在明顯差異。 3.對部分病毒基因測序,結(jié)合Los Alamos數(shù)據(jù)庫中已公布的中國地區(qū)HIV-1B亞型序列對確定的14個免疫優(yōu)勢區(qū)進行分析,除位于Pol的免疫優(yōu)勢區(qū)外,其他免疫優(yōu)勢區(qū)基因序列變異程度顯著低于相對應(yīng)全基因序列,氨基酸序列變異程度顯著低于相應(yīng)蛋白氨基酸序列,提示這些免疫優(yōu)勢區(qū)具有高度的保守性。 4.在確定的免疫優(yōu)勢區(qū)中發(fā)現(xiàn)21個中國人群常見等位基因限制的表位,其中11個表位(VKVVEEKAF,EKAFSPEV,FSPEVIPMF, SPEVIPMF, VIPM FSAL,TPQDLNTM, EGATPQDL,GQMREPRGSDI,YVDRFYKTL,RDYV DRFFKT, TLRAEQATQD)位于Gag區(qū),6個表位(QVPLRPMTYK, WIYHT QGYF,TQGYFPDWQNY,GYFPDWQNY, YFPDWQNYT, NYTPGPGVR Y)位于Nef區(qū);4個表位(LWVTVYYGV,TVYYGVPVWK,VYYGVP VWKEA,RAIEAQQHL)位于Env區(qū)。由于Nef區(qū)表位誘導(dǎo)的CTL應(yīng)答可能是非保護性的,故疫苗設(shè)計中應(yīng)注意刪除,而位于Gag和Env區(qū)的表位誘導(dǎo)的CTL應(yīng)答可能具有保護作用,可用于構(gòu)建針對中國人群的HIV疫苗。 綜上所述,中國人群HIV-1B亞型感染者HIV-1特異性CTL應(yīng)答模式與白種人群和非洲人群存在明顯不同;本課題中共確定14個免疫優(yōu)勢區(qū),絕大部分免疫優(yōu)勢區(qū)具有高度的保守性,其中共發(fā)現(xiàn)21個中國人群常見等位基因限制的表位,能誘導(dǎo)強大的CTL應(yīng)答的保守性表位,對于研發(fā)針對中國人群的安全、有效的HIV疫苗可能具有重要的現(xiàn)實意義。
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【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

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本文編號：2424806