【摘要】： GAS(生長休止蛋白)主要表達(dá)于細(xì)胞的休止期,調(diào)控細(xì)胞生長分化。其中GAS7首次發(fā)現(xiàn)于血清剝奪的鼠類成纖維細(xì)胞,在體內(nèi)主要表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng),且特異性地在極度分化的神經(jīng)細(xì)胞大量表達(dá)。GAS7對原代培養(yǎng)的小腦神經(jīng)細(xì)胞分化成熟是必需的,而且有研究表明GAS7在PC12細(xì)胞的高表達(dá)可以促進(jìn)PC12細(xì)胞突起的形成,而應(yīng)用反義寡核苷酸抑制GAS7在培養(yǎng)的小腦細(xì)胞的表達(dá)將顯著抑制細(xì)胞突起的形成,因此GAS7被認(rèn)為是成熟神經(jīng)細(xì)胞的標(biāo)志并具有潛在的抗癌功能。近年來GAS7的功能已引起有關(guān)學(xué)者的重視,但現(xiàn)在尚未有商品化的抗體,而關(guān)于GAS7在體內(nèi)的表達(dá)定位及分布等相關(guān)資料尚有所欠缺。本研究主要制備抗GAS7抗血清及用免疫組織化學(xué)、Western blot和RT-PCR方法觀察大鼠神經(jīng)系統(tǒng)中GAS7的表達(dá)定位及分布及雌激素對大鼠海馬GAS7表達(dá)的影響,以期為研究GAS7在神經(jīng)系統(tǒng)的功能提供重要的實驗資料。 目的: 1.利用GST融合蛋白作免疫原制備抗大鼠GAS7多克隆抗血清。 2.觀察大鼠神經(jīng)系統(tǒng)中GAS7不同異構(gòu)體的表達(dá)定位及分布。 3.研究雌激素替代治療對大鼠海馬生長休止蛋白7表達(dá)的作用和影響。 方法: 1.利用基因工程重組的表達(dá)質(zhì)粒誘導(dǎo)表達(dá)的GST融合蛋白作免疫原制備抗大鼠GAS7多克隆抗血清。 2.應(yīng)用免疫組織化學(xué)、Western blot和RT-PCR方法觀察大鼠神經(jīng)系統(tǒng)中GAS7的表達(dá)定位及分布。 3.制作卵巢切除雌激素替代模型,以免疫組織化學(xué),Western blot觀察雌激素對大鼠海馬GAS7表達(dá)的作用及影響。 結(jié)果: 1.成功制備抗大鼠GAS7多克隆抗血清。 2.GAS7廣泛表達(dá)于大鼠神經(jīng)系統(tǒng),在不同的部位有不同的GAS7表達(dá)。 3.雌激素上調(diào)GAS7b的表達(dá),而下調(diào)GAS7a的表達(dá)。 結(jié)論: 1.不同的GAS7蛋白可能參于神經(jīng)系統(tǒng)不同的功能。 2.雌激素可能通過調(diào)節(jié)GAS7不同異構(gòu)體在海馬的表達(dá)以實現(xiàn)其延緩神經(jīng)元老化的功能.
[Abstract]:GAS (growth rest protein) is mainly expressed in the resting period of cells and regulates cell growth and differentiation. GAS7 was first found in serum-deprived rat fibroblasts, mainly expressed in the nervous system and specifically expressed in highly differentiated neurons. GAS7 is necessary for the differentiation and maturation of primary cultured cerebellar nerve cells. Moreover, some studies have shown that the high expression of GAS7 in PC12 cells can promote the formation of PC12 cell processes, while the inhibition of GAS7 expression in cultured cerebellar cells by antisense oligonucleotides will significantly inhibit the formation of cell processes. Therefore, GAS7 is considered to be a marker of mature nerve cells and has potential anti-cancer function. In recent years, the function of GAS7 has attracted the attention of the scholars concerned, but there is no commercial antibody, but the expression localization and distribution of GAS7 in vivo and other related data are still lacking. The aim of this study was to prepare antiserum against GAS7 and to observe the localization and distribution of GAS7 in the nervous system of rats by immunohistochemical, Western blot and RT-PCR and the effect of estrogen on the expression of GAS7 in hippocampus of rats. In order to provide important experimental data for studying the function of GAS7 in nervous system. Objective: 1. Anti-rat GAS7 polyclonal antiserum was prepared by using GST fusion protein as immunogen. 2. To observe the expression localization and distribution of different isomers of GAS7 in the nervous system of rats. 3. To study the effect and effect of estrogen replacement therapy on the expression of hippocampal growth reversion protein 7 in rats. Methods: 1. The recombinant GST fusion protein was used as immunogen to prepare anti-rat GAS7 polyclonal antiserum. 2. Immunohistochemical, Western blot and RT-PCR methods were used to observe the localization and distribution of GAS7 expression in rat nervous system. 3. The ovariectomized estrogen replacement model was established and the effects of estrogen on the expression of GAS7 in hippocampus of rats were observed by immunohistochemical, Western blot. Results: 1. Anti-rat GAS7 polyclonal antiserum was successfully prepared. 2.GAS7 is widely expressed in the nervous system of rats and has different GAS7 expression in different sites. 3. Estrogen upregulated the expression of GAS7b and down-regulated the expression of GAS7a. Conclusion: 1. Different GAS7 proteins may be involved in different functions of the nervous system. 2. Estrogen may delay the aging of neurons by regulating the expression of different isomers of GAS7 in the hippocampus.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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本文編號：2420361