【摘要】： 研究背景:臨床上處理失代償?shù)男牧λソ卟∪?需要應(yīng)用正性變力性藥物改善血流動(dòng)力學(xué)紊亂,但是目前所有變力性藥物對(duì)心肌的舒張功能均無明顯改善作用。面對(duì)心排血量不足而又有舒張功能障礙的病人,臨床中迫切需要能同時(shí)改善心肌收縮功能與舒張功能的藥物。我們對(duì)提高心肌變力性模式的設(shè)想是同時(shí)激動(dòng)心肌L-型鈣通道(L-type calcium channel,LCC),Na/Ca交換體(Na/Ca exchanger, NCX)和鈉泵,其中增強(qiáng)心肌LCC作為提高心肌收縮功能的有效途徑,而舒張功能的改善通過激動(dòng)NCX和鈉泵來實(shí)現(xiàn)。鑒于目前在國(guó)內(nèi)外還未見同時(shí)激動(dòng)NCX、LCC和鈉泵的的實(shí)驗(yàn)或臨床研究,也未發(fā)現(xiàn)具有這一復(fù)合作用的藥物,為了驗(yàn)證我們從理論上設(shè)計(jì)的提高心肌變力性的新模式,我們嘗試?yán)每闺目贵w實(shí)現(xiàn)選擇性地同時(shí)激動(dòng)NCX、LCC和鈉泵的目的。 研究目的:(1)通過對(duì)LCC,NCX和鈉泵關(guān)鍵部位氨基酸序列進(jìn)行相似性比對(duì)分析,設(shè)計(jì)肽段,并以此為抗原,對(duì)大鼠進(jìn)行主動(dòng)免疫,制備出抗肽抗體,然后分離提純大鼠血清中的IgG。利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)各抗體對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白離子電流的影響,篩選出同時(shí)激動(dòng)鈉鈣交換體,L-型鈣通道以及鈉泵的理想抗肽抗體。(2)觀察抗肽抗體對(duì)離體大鼠心臟收縮舒張功能和冠脈阻力的影響,及其對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)張力的作用。(3)觀察抗肽抗體對(duì)單個(gè)心室肌細(xì)胞鈣瞬變及細(xì)胞收縮的影響,以分析抗體對(duì)心肌變力性的作用機(jī)制。(4)觀察抗肽抗體對(duì)急性衰竭離體灌流心臟心功能的影響。 研究方法:(1)通過對(duì)LCC,NCX和鈉泵關(guān)鍵部位氨基酸序列進(jìn)行相似性比對(duì)分析,設(shè)計(jì)了多條肽段,由美聯(lián)(西安)生物科技有限公司合成。用肽段對(duì)大鼠進(jìn)行主動(dòng)免疫,采用ELISA方法對(duì)免疫后大鼠血清抗體滴度進(jìn)行監(jiān)測(cè),應(yīng)用親和層析法提取和純化抗血清中的抗體IgG,并用PAGE膠凝膠電泳對(duì)其純度進(jìn)行檢測(cè),用考馬斯亮蘭試劑盒對(duì)抗體進(jìn)行定量。(2)分離成年大鼠及豚鼠心室肌細(xì)胞,采用膜片鉗全細(xì)胞記錄方法,觀察抗肽抗體對(duì)ICa-L,INCX、INa pump以及INa、Ito、Ik1以及Ik的影響。篩選出同時(shí)選擇性激動(dòng)ICa-L,INCX、INa pump的抗肽抗體。(3)利用Langendorff心臟灌流裝置觀察抗肽抗體對(duì)離體大鼠心臟心功能和冠脈阻力的影響,并觀察在灌流期間有無心律失常的發(fā)生。(4)通過離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)實(shí)驗(yàn),觀察抗肽抗體對(duì)大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)張力的影響。(5)利用離子影像分析系統(tǒng),觀察抗肽抗體對(duì)單個(gè)心室肌細(xì)胞內(nèi)鈣瞬變及細(xì)胞長(zhǎng)度的影響。離子影像分析系統(tǒng)記錄激發(fā)光為340nm和380nm的成對(duì)系列圖像,從同一對(duì)系列計(jì)算出340nm/380nm的熒光比值(F340/F380),并從同一系列圖像計(jì)算得到細(xì)胞長(zhǎng)度隨時(shí)間的變化。(6)利用Langendorff心臟灌流裝置制備大鼠急性心衰模型:對(duì)離體大鼠心臟進(jìn)行灌流,先用臺(tái)氏液灌流30分鐘,穩(wěn)定后再用含0.1g/L戊巴比妥鈉的臺(tái)氏液繼續(xù)灌流,當(dāng)心肌主動(dòng)收縮力下降至原來的1/2左右時(shí),即可認(rèn)為急性心衰模型制備成功。觀察抗肽抗體對(duì)急性衰竭離體大鼠心臟心功能的影響。 研究結(jié)果:(1)用合成的肽段對(duì)大鼠進(jìn)行主動(dòng)免疫,經(jīng)過九周的主動(dòng)免疫后,各肽段組抗體滴度均顯著增長(zhǎng)。應(yīng)用親和層析法提取和純化抗血清中的抗體IgG,PAGE膠凝膠
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R33

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 劉元元,沈筱同;黃芪甙IV與米利酮及哇巴因?qū)π乃ル嗍蟮膹?qiáng)心效應(yīng)比較[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2001年06期

2 崔香麗,周尚忠,吳博威;離子影像系統(tǒng)測(cè)定分離的單個(gè)心肌細(xì)胞鈣瞬變和收縮[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2002年05期

3 蔣彬;鈉-鈣交換與慢性心力衰竭[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2002年06期

4 蘇素文,王永利,張永健;低濃度毒毛旋花子苷原對(duì)離體豚鼠衰竭心臟的影響[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2003年02期

5 陸菁,徐向華,王曉良;KB-R7943對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞Na~+-Ca~(2+)交換電流的作用[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2001年01期

6 龔冬梅,單宏麗,周宇宏,董德利,楊寶峰;哇巴因和烏頭堿誘發(fā)豚鼠和大鼠心律失常的離子作用靶點(diǎn)[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2004年05期

7 林吉進(jìn),霍霞,丁報(bào)春;心肌L型鈣通道/電流及其在心肌肥大和心力衰竭時(shí)的變化[J];中國(guó)病理生理雜志;2000年09期

8 蔣彬,周希平,Achilles J. Pappano;L型鈣流和反向鈉—鈣交換在豚鼠心室肌細(xì)胞興奮—收縮偶聯(lián)中的作用[J];中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志;2003年02期

9 陸媛,戴順齡,段金虹,程錦軒,張儀華,吳云清,左萍萍,葛秦生;植物雌激素α-玉米赤霉醇抑制(-)BayK8644誘發(fā)的兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞胞內(nèi)游離鈣離子濃度的升高[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2005年01期

，

本文編號(hào)：2392322