【摘要】： 研究背景:臨床上處理失代償?shù)男牧λソ卟∪?需要應(yīng)用正性變力性藥物改善血流動力學(xué)紊亂,但是目前所有變力性藥物對心肌的舒張功能均無明顯改善作用。面對心排血量不足而又有舒張功能障礙的病人,臨床中迫切需要能同時改善心肌收縮功能與舒張功能的藥物。我們對提高心肌變力性模式的設(shè)想是同時激動心肌L-型鈣通道(L-type calcium channel,LCC),Na/Ca交換體(Na/Ca exchanger, NCX)和鈉泵,其中增強心肌LCC作為提高心肌收縮功能的有效途徑,而舒張功能的改善通過激動NCX和鈉泵來實現(xiàn)。鑒于目前在國內(nèi)外還未見同時激動NCX、LCC和鈉泵的的實驗或臨床研究,也未發(fā)現(xiàn)具有這一復(fù)合作用的藥物,為了驗證我們從理論上設(shè)計的提高心肌變力性的新模式,我們嘗試利用抗肽抗體實現(xiàn)選擇性地同時激動NCX、LCC和鈉泵的目的。 研究目的:(1)通過對LCC,NCX和鈉泵關(guān)鍵部位氨基酸序列進行相似性比對分析,設(shè)計肽段,并以此為抗原,對大鼠進行主動免疫,制備出抗肽抗體,然后分離提純大鼠血清中的IgG。利用全細胞膜片鉗技術(shù)檢測各抗體對大鼠心室肌細胞膜轉(zhuǎn)運蛋白離子電流的影響,篩選出同時激動鈉鈣交換體,L-型鈣通道以及鈉泵的理想抗肽抗體。(2)觀察抗肽抗體對離體大鼠心臟收縮舒張功能和冠脈阻力的影響,及其對離體大鼠胸主動脈環(huán)張力的作用。(3)觀察抗肽抗體對單個心室肌細胞鈣瞬變及細胞收縮的影響,以分析抗體對心肌變力性的作用機制。(4)觀察抗肽抗體對急性衰竭離體灌流心臟心功能的影響。 研究方法:(1)通過對LCC,NCX和鈉泵關(guān)鍵部位氨基酸序列進行相似性比對分析,設(shè)計了多條肽段,由美聯(lián)(西安)生物科技有限公司合成。用肽段對大鼠進行主動免疫,采用ELISA方法對免疫后大鼠血清抗體滴度進行監(jiān)測,應(yīng)用親和層析法提取和純化抗血清中的抗體IgG,并用PAGE膠凝膠電泳對其純度進行檢測,用考馬斯亮蘭試劑盒對抗體進行定量。(2)分離成年大鼠及豚鼠心室肌細胞,采用膜片鉗全細胞記錄方法,觀察抗肽抗體對ICa-L,INCX、INa pump以及INa、Ito、Ik1以及Ik的影響。篩選出同時選擇性激動ICa-L,INCX、INa pump的抗肽抗體。(3)利用Langendorff心臟灌流裝置觀察抗肽抗體對離體大鼠心臟心功能和冠脈阻力的影響,并觀察在灌流期間有無心律失常的發(fā)生。(4)通過離體大鼠胸主動脈環(huán)實驗,觀察抗肽抗體對大鼠離體胸主動脈環(huán)張力的影響。(5)利用離子影像分析系統(tǒng),觀察抗肽抗體對單個心室肌細胞內(nèi)鈣瞬變及細胞長度的影響。離子影像分析系統(tǒng)記錄激發(fā)光為340nm和380nm的成對系列圖像,從同一對系列計算出340nm/380nm的熒光比值(F340/F380),并從同一系列圖像計算得到細胞長度隨時間的變化。(6)利用Langendorff心臟灌流裝置制備大鼠急性心衰模型:對離體大鼠心臟進行灌流,先用臺氏液灌流30分鐘,穩(wěn)定后再用含0.1g/L戊巴比妥鈉的臺氏液繼續(xù)灌流,當(dāng)心肌主動收縮力下降至原來的1/2左右時,即可認為急性心衰模型制備成功。觀察抗肽抗體對急性衰竭離體大鼠心臟心功能的影響。 研究結(jié)果:(1)用合成的肽段對大鼠進行主動免疫,經(jīng)過九周的主動免疫后,各肽段組抗體滴度均顯著增長。應(yīng)用親和層析法提取和純化抗血清中的抗體IgG,PAGE膠凝膠
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【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R33

【參考文獻】

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本文編號：2392322